JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:24 د • July 8th, 2025
ابدأ بخلايا عصبية جنينية محفوظة بالتبريد تحتوي على التبريد وضعها في كتلة تسخين للذوبان المتحكم فيه.
بعد ذلك ، انقل الخلايا العصبية المذابة إلى أنبوب وقم بتخفيفها بوسط عصبي قاعدي متنقلا لموازنة الضغط الاسموزي ومنع تحلل الخلايا.
هذا يولد تعليقا متجانسا مع خلايا عصبية مشتتة بشكل موحد.
قم بزرع المعلق العصبي المخفف على صفيحة متعددة الآبار مطلية ب poly-L-lysine تحتوي على وسط عصبي أساسي غني بالعناصر الغذائية والمضادات الحيوية.
احتضان للسماح بولي-L-يسين مشحونة إيجابيا للتفاعل مع الخلايا العصبية عن طريق التفاعلات الكهروستاتيكية, تسهيل الالتزام.
تزويد الآبار بالوسائط العصبية القاعدية الجديدة.
احتضان الخلايا في نفس الوسط في ظروف رطبة لمنع تبخر الوسائط.
تستخدم الخلايا العصبية الجنينية العناصر الغذائية وتنمو عن طريق تطوير العمليات العصبية وتشكيل الخلايا العصبية الأولية.
يحافظ الوسط العصبي القاعدي على الخلايا العصبية الأولية التي تبدو متباعدة على نطاق واسع ، مما يولد ثقافة أولية منخفضة الكثافة مع وصلات عصبية.
ابدأ بطلاء صفيحة دقيقة مكونة من 96 بئرا ب 100 ميكرولتر من بولي إل ليسين لكل بئر. بعد ذلك ، احتضن الألواح طوال الليل عند 37 درجة مئوية. في نهاية الحضانة ، قم بإزالة محلول بولي إل ليسين. اغسل الأطباق مرتين بالماء المعقم ومرة واحدة باستخدام وسط استزراع طازج خال من المكملات الغذائية. ضع الأطباق حتى تجف. يمكن لف الأطباق الجافة وتخزينها لمدة تصل إلى شهر واحد عند 4 درجات مئوية.
لبدء بذر الخلايا ، أضف 50 ميكرولترا من وسط الاستزراع إلى كل بئر في اللوحة المطلية. املأ الآبار الطرفية ب 200 ميكرولتر من الماء المعقم واحتضان الصفيحة لمدة ساعة عند 37 درجة مئوية ب 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
قم بإزالة الخلايا العصبية المبردة من خزان النيتروجين السائل وضعها في كتلة حرارية 37 درجة مئوية لإذابة محتوياتها جزئيا. باستخدام ماصة سعة 1 مليلتر ذات طرف عريض التجويف ، انقل محتويات القارورة ببطء إلى أنبوب معقم سعة 50 مل. اشطف التبريد الفارغ ب 1 ملليلتر من وسط الثقافة في درجة حرارة الغرفة. انقل محلول الشطف إلى أنبوب سعة 50 مليلتر يحتوي على تعليق الخلية.
بعد ذلك ، أضف 9 ملليلتر من وسط ثقافة درجة حرارة الغرفة بالتنقيط في أنبوب 50 مليلتر ، مما يجعل الحجم يصل إلى 11 ملليلترا. بعد عد الخلايا باستخدام مقياس الدم ، انقل معلق الخلية إلى خزان. الآن، باستخدام ماصة متعددة القنوات ذات أطراف عريضة التجويف، قم بتوزيع معلق الخلية بعدد نهائي يبلغ 1.0 × 104 خلايا لكل بئر في الصفيحة المطلية المكونة من 96 بئرا.
احتضان الخلايا العصبية لمدة 1 إلى 2 ساعة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون. ثم استبدل وسط الثقافة ب 100 ميكرولتر من وسط الاستزراع المسخن مسبقا واحتضنه مرة أخرى في نفس الظروف.