توليد العضيات الدماغية المستحثة متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية

خذ مستعمرات من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات ، أو iPSCs ، المزروعة على مصفوفة داعمة.

أضف محلولا يحتوي على إنزيمات لفصل المستعمرات إلى خلايا مفردة.

انقل الخلايا إلى أنبوب ، وقم بطردها المركزي ، وتخلص من المادة الطافية.

إعادة تعليق iPSCs في وسط النمو.

انقل الخلايا إلى صفيحة دقيقة تحتوي على ألياف بوليمر متوافقة حيويا.

أجهزة الطرد المركزي لتجميع iPSCs بالقوة, تشكيل الأجسام الجنينية, أو EBs, على سقالة البوليمر.

الانتقال إلى وسيط الحث العصبي الذي يعزز انتشار iPSC والتمايز إلى الخلايا الجذعية العصبية, الخلايا السلف, والخلايا العصبية غير الناضجة.

عند الحضانة ، تخضع الخلايا للتنظيم الذاتي.

ضع الأجسام الجنينية على ورقة مدملة وأضف قطرات تحتوي على بروتينات مصفوفة خارج الخلية.

احتضان لترسيخ المصفوفة ، وتضمين EBs.

انقل EBs إلى صفيحة دقيقة تحتوي على وسيط صيانة عصبي. حضن.

تخضع EBs للتكاثر الخلوي لتشكيل نتوءات وتبرعم وتتمايز إلى خلايا عصبية ناضجة ، وتشكل عضيات دماغية.

استنشق الوسط بماصة ، واغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام DPBS. ثم أضف 500 ميكرولتر من محلول انفصال الخلية ، أو 0.5 مللي مولار EDTA ، لفصل المستعمرات ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 3 إلى 5 دقائق. بعد ذلك ، أضف 1 مليلتر من وسائط E8 الطازجة إلى كل بئر ، وقم بالماصة برفق لفصل جميع الخلايا.

انقل تعليق الخلية بالكامل إلى أنبوب طر