تقنية الزراعة المشتركة غير المباشرة للخلايا العصبية والخلايا النجمية لدراسة تفاعلات الخلايا العصبية الدبقية

ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على غشاء قابل للاختراق مطلي ب poly-D-lysine.

أضف وسط نمو الخلايا النجمية إلى البئر وبذور الخلايا النجمية ، وهي خلية دبقية متخصصة ، في الملحق.

احتضان للسماح بالتصاق الخلية ب poly-D-lysine عبر التفاعلات الكهروستاتيكية وتشكيل طبقة أحادية.

استبدل وسط الخلايا النجمية بوسط زراعة الخلايا العصبية.

انقل هذا الملحق إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على الخلايا العصبية الجنينية الأولية الملتصقة بالفئران فوق غطاء مغلف بالبوليمر.

احتضن لإنشاء ثقافة مشتركة غير مباشرة للخلايا العصبية والخلايا النجمية ، حيث يتم فصل نوعي الخلايا جسديا ولكنهما يشتركان في نفس وسط الاستزراع.

تفرز الخلايا النجمية العديد من العوامل العصبية الضرورية لبقاء الخلايا العصبية ونموها.

تهاجر هذه العوامل من خلال الدعم المنفذ وتتفاعل مع الخلايا العصبية الأولية. هذا يعزز تمايزها ويشكل إسقاطات عصبية.

تستطيل هذه الإسقاطات وتنشئ روابط متشابكة بين الخلايا العصبية ، مما يشير إلى التفاعلات بين الخلايا العصبية الدبقية.

قم بتغطية كل إدراج ب 10 ميكروغرام لكل مليلتر من بولي د-يسين واحتضانه لمدة ساعة واحدة. بعد ساعة واحدة ، اغسل الإدخالات مرتين باستخدام PBS.

في غضون ذلك ، قم بشفط وسط الخلايا النجمية واغسل المزرعة مرة واحدة باستخدام 10 مل من PBS لضمان إزالة المصل المتبقي. بعد ذلك ، أضف 3 ملليلتر من 0.05٪ تريبسين EDT