عزل الخلايا الدبقية الصغيرة عن قشرة دماغ الفأر البالغ

خذ قشرة دماغ الفأر التي تم حصادها حديثا.

يقطع الأنسجة إلى أجزاء صغيرة. انقلها إلى الخالط المبرد الذي يحتوي على مخزن مؤقت مع مثبطات RNase و DNases.

تجانس الأنسجة على النحو الأمثل لتحرير الخلايا في التعليق ، والحفاظ على الخلايا الدبقية الصغيرة بشكل انتقائي نظرا لقدرتها على تحمل قوى القص والحفاظ على بقاء الغشاء ، مع القضاء على الخلايا العصبية والخلايا الدبقية الأخرى.

علاوة على ذلك ، تعمل مثبطات RNase على تحلل RNases ، بينما تعمل DNases على تحلل أي DNA ملوث.

مرر معلق الخلية عبر مصفاة خلوية لإزالة بقايا الأنسجة.

نقل تعليق الخلية إلى أنبوب. جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية المحتوية على الإنزيمات. قم بإعادة تعليق الخلايا في مخزن مؤقت.

أضف الميكروبيدات المغناطيسية المضادة للمايلين. تستهدف هذه الميكروبيدات بروتين المايلين ، وتربط بقايا المايلين والخلايا قليلة التغصن.

قم بتحميل خليط خلية الخرز في عمود استنفاد يتكون من مصفوفة ذات كرات مغناطيسية حديدية.

تحت المجال المغناطيسي المطبق ، يتم الاحتفاظ بحطام المايلين المرتبط بالميكروبيدات والخلايا قليلة التغصن داخل العمود ، بينما تمر الخلايا الدبقية الصغيرة من خلالها.

اغسل العمود بالمخزن المؤقت واجمع التدفق الذي يحتوي على الخلايا الدبقية الصغيرة.

أولا ، استخدم شفرة حلاقة لتقطيع كل منطقة من مناطق الدماغ إلى قطع دقيقة أقل من 1 ملليمتر مكعب. باستخد