JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:00 د • July 8th, 2025
ابدأ بغرفة ميكروفيليدية مطلية بالبوليمر مع آبار قريبة وبعيدة متصلة عبر أخاديد دقيقة متعددة.
في البئر القريب ، ضع أنسجة الحبل الشوكي الجنيني للفأر الغنية بالخلايا العصبية الحركية النامية.
استكمل هذا جيدا بوسط مغذي. احتضان للسماح بنمو الخلايا العصبية والالتصاق بالسطح المطلي بالبوليمر.
في وقت لاحق ، أضف وسط مغذي خال من عامل النمو إلى البئر القريب.
في الآبار البعيدة ، أضف حجما أكبر من وسط المغذيات الذي يحتوي على عوامل النمو لخلق اختلافات في التركيز والحجم.
تتسبب هذه الاختلافات في نمو المحاور ، الإسقاطات العصبية الأطول ، باتجاه الآبار البعيدة عبر الأخاديد الدقيقة.
أضف محلول صبغة الفلورسنت في كلا البئرين.
تدخل جزيئات الصبغة إلى الخلايا العصبية وتلطخ الميتوكوندريا والعضيات الحمضية في كلا الطرفين.
في التصوير الحي متحد البؤر ، تتحرك العضيات الملطخة بالفلورسنت في كلا الاتجاهين بين أجسام الخلايا العصبية والمحاور ، مما يؤكد النقل المحوري في الخلايا العصبية الحركية.
تخلص من جميع الوسائط من المقصورة القريبة من MFC. التقط نبتة واحدة من الحبل الشوكي بماصة بحجم إجمالي يبلغ أربعة ميكرولترات وحقنها في أقرب وقت ممكن من الكهف. اسحب أي سائل زائد من البئر القريب عبر المنافذ الجانبية. كرر الخطوة السابقة مرتين أخريين ، وتأكد من تضمين النماذج الخارجية في القناة القريبة. ببطء ، أضف 150 ميكرولترا من وسط SCEX إلى البئر القريب.
بعد يوم واحد من الطلاء ، استبدل وسط SCEX في المقصورة القريبة ، وأضف وسيط SCEX غني إلى المقصورة البعيدة ، مع الحفاظ على تدرج حجم لا يقل عن 15 ميكرولترا لكل بئر بين الآبار البعيدة والقريبة. بعد أربعة إلى ستة أيام ، يجب أن تعبر المحاور إلى المقصورة البعيدة وتكون جاهزة لتصوير النقل المحوري.
لتسمية الميتوكوندريا والمقصورات الحمضية ، قم بإعداد وسيط SCEX طازج باستخدام 100 نانومولار Mitotracker أحمر غامق FM و 100 نانومولار LysoTracker أحمر ، وأضفه إلى غرف الموائع الدقيقة. احتضنها لمدة 30 إلى 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، ثم اغسلها ثلاث مرات بوسط SCEX دافئ. تابع التصوير المباشر للنقل المحوري ، واحصل على سلسلة صور بفاصل زمني مدتها 100 فواصل زمنية بإجمالي 5 دقائق لكل فيلم.