مجزأة ثقافة الخلايا العصبية الأولية الفئران باستخدام رقائق البلاستيك ميكروفلويديك

خذ شريحة بلاستيكية ميكروسويدية تتكون من خزانات ومقصورات جسدية ، بالإضافة إلى خزانات ومقصورات محورية متصلة بواسطة أخاديد دقيقة.

أضف محلول طلاء مسبق لتشبع المقصورات والأخاديد ، مما يمنع انحباس فقاعات الهواء.

استنشق المحلول ، وترك المقصورات الرئيسية ممتلئة. يغسل مع العازلة.

قم بتغطية الآبار ببوليمر اصطناعي يسهل التصاق الخلايا العصبية. اغسل بمخزن مؤقت وأضف وسائط الثقافة لمنع الرقاقة من الجفاف.

لزرع تعليق الخلايا العصبية في الحصين الفئران ، استنشق الوسائط.

قم بتحميل التعليق في الخزانات الجسدية. تدخل الخلايا العصبية وتعلق على المقصورة الجسدية.

أضف وسائط الثقافة العصبية إلى الآبار واحتضنها. عوامل النمو الموجودة في وسائل الإعلام تسهل نمو الخلايا العصبية.

تدريجيا ، تقوم الخلايا العصبية بتمديد محاورها ، والتي تنمو في الحجرة المحورية من خلال الأخاديد الدقيقة.

يمنع ضيق الأخاديد دخول أجسام الخلايا العصبية ، مما يضمن الفصل المادي للمناطق الجسدية والمركزية

للبدء ، ضع شريحة معقمة متعددة الأجزاء في طبق بتري. أضف 100 ميكرولتر من محلول الطلاء المسبق إلى البئر العلوي الأيسر للشريحة ، واتركه يتدفق عبر القناة الرئيسية إلى البئر المجاور. بعد ذلك ، املأ البئر الأيسر السفلي من الرقاقة ب 100 ميكرولتر من محلول الطلاء المسبق.

هذه المرة ، انتظر خمس دقائق للسماح للمحلول بالتدفق عبر الأخاديد الدقيقة. الآن ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الطلاء المسبق إلى البئر العلوي الأيمن ، واتركه يتدفق عبر القناة الرئيسية إلى البئر المجاور. بعد 90 ثانية ، املأ الجزء السفلي الأيمن جيدا ب 100 ميكرولتر من محلول الطلاء المسبق ، واحتضن الرقاقة لمدة 10 دقائق.

قم بزاوية طرف الماصة بعناية بعيدا عن القناة الرئيسية واستنشق المحلول من كل بئر. ثم أضف على الفور 150 ميكرولتر من PBS إلى الجزء العلوي الأيسر جيدا وانتظر 1.5 دقيقة. بعد ذلك ، أضف 150 ميكرولترا من PBS إلى البئر السفلي الأيسر ، وانتظر خمس دقائق للسماح للسائل بالتدفق عبر الأخاديد الدقيقة.

ثم أضف 150 ميكرولترا من PBS إلى الآبار العلوية اليمنى والسفلية اليمنى بهذا الترتيب. بعد 10 دقائق ، مرة أخرى ، قم بشفط PBS وكرر خطوات الغسيل مرة ثانية. بعد الغسيل الثاني ، قم بشفط PBS الآبار كما كان من قبل عن طريق زاوية طرف الماصة بعيدا عن فتحة القناة.

ثم أضف 100 ميكرولتر من 0.5 مجم لكل مل من محلول بولي دي ليسين إلى البئر العلوي الأيسر من الشريحة. انتظر 1 و 1/2 دقيقة ثم املأ الجزء السفلي الأيسر جيدا ب 100 ميكرولتر من محلول بولي دي ليسين. كرر هذه العملية على النصف الأيمن من الشريحة. أغلق طبق بتري ، ثم ضع الشريحة في حاضنة على حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة.

بعد الحضانة ، اشطف الرقاقة مرتين باستخدام PBS كما هو موضح سابقا. بعد ذلك ، استنشق PBS من الجهاز. على الفور ، أضف 100 ميكرولتر من وسائط زراعة الخلايا إلى البئر العلوي الأيسر من الشريحة. بعد 1 و 1/2 دقيقة ، أضف الوسائط إلى أسفل اليسار جيدا.

انتظر خمس دقائق للسماح للوسائط بالتدفق عبر الأخاديد الدقيقة ، ثم كرر عملية التعبئة على الجانب الأيمن من الشريحة. تحضير معلق خلوي للخلايا العصبية في الحصين الفئران المنفصلة وفقا للبروتوكولات المعمول بها. قم بإزالة غالبية الوسائط في كل بئر من الشريحة ، لكن اترك القنوات ممتلئة.

بعد ذلك ، قم بتحميل 5 ميكرولترات من تعليق الخلية على الفور في البئر العلوي الأيمن و 5 ميكرولترات أخرى من تعليق الخلية في البئر السفلي الأيمن. عند تحميل الخلايا ، وجه طرف الماصة نحو القناة الرئيسية. بعد تحميل الخلايا ، انقل الشريحة إلى مرحلة المجهر للتأكد من أن الخلايا العصبية في القناة الرئيسية.

بعد الانتظار لمدة 5 دقائق حتى تلتصق الخلايا ، أضف ما يقرب من 150 ميكرولترا من وسائط الثقافة العصبية إلى كل من الآبار العلوية والسفلية اليمنى. ثم أضف 150 ميكرولترا من الوسائط إلى كل من الآبار العلوية والسفلية اليسرى. غطي طبق بتري ، وضعي الشريحة في صينية مرطبة في حاضنة 5٪ ثاني أكسيد الكربون 37 درجة مئوية.