JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:12 د • July 8th, 2025
ابدأ بصيحة متعددة الآبار تحتوي على الخلايا النجمية المعدلة وراثيا. تلتصق هذه الخلايا بغطاء يوضع في وسط الخلايا النجمية.
تعبر هذه الخلايا المعدلة وراثيا عن عوامل التحول التي تجبر انتقالها إلى الخلايا العصبية. تسمى هذه العملية إعادة برمجة الخلايا العصبية.
خذ وسيطا للتمايز العصبي يحتوي على جزيئات محددة ومكملات B27. توفر هذه المكونات معا العناصر الغذائية الأساسية وعوامل التمايز.
استبدل وسط الخلايا النجمية بوسط التمايز العصبي.
احتضان الخلايا النجمية للمدة المطلوبة.
أثناء الحضانة ، تؤدي عوامل التحول التي تعبر عنها الخلايا النجمية إلى سلسلة من الأحداث الجزيئية التي تمكن من تحويل الخلايا النجمية إلى خلية عصبية.
تحتويالخلايا العصبية المحولة على أجسام خلوية أصغر وعمليات ممدودة ، على غرار الخلايا العصبية النموذجية.
تحضير وسيط التمايز العصبي عن طريق إضافة ملحق B27 واحد إلى 49 مل من وسط الثقافة الأساسي. بعد 24 إلى 48 ساعة ، اعتمادا على ما إذا كانت الخلايا قد تم نقلها أو نقلها ، استبدل وسط الخلايا النجمية بوسط تمايز عصبي واحد مليلتر لكل بئر. استزراع الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 9٪ ثاني أكسيد الكربون.
لزيادة كفاءة إعادة البرمجة, تكملة وسط التمايز العصبي مع فورسكولين ودورسومورفين إلى تركيز نهائي من 30 ميكرومولار وميكرومولار واحد على التوالي عند استبدال وسط الخلايا النجمية مع وسط التمايز. عند اختيار علاج الخلايا مع فورسكولين ودورسومورفين, توفير جرعة ثانية من دورسومورفين بعد يومين من العلاج الأولي. أضف هذا العلاج الثاني مباشرة إلى وسط الاستزراع.