تحضير شرائح الدماغ الإسفيني لتصور الخلايا العصبية السمعية

ابدأ بدماغ الفأر وقم بتشريحه أفقيا أسفل الجزء الخلفي للحفاظ على الخلايا العصبية السمعية الحاسمة لمعالجة الصوت.

قم بتركيب القسم الخلفي على قرص مغناطيسي. ضع كتلة أجار لتثبيت الأنسجة أثناء التقطيع.

انقل القسم إلى مرحلة غرفة التقطيع للاهتزاز المجهز بشفرة.

أدخل عازلة باردة وغاز كربوجين فقاعي يوفر الأكسجين ويحافظ على سلامة الخلايا العصبية.

قم بعمل قطع أفقي متساو لإزالة الجزء العلوي من قسم الدماغ.

بعد ذلك ، قم بإمالة المرحلة واستمر في قطع القسم المتبقي حتى يصبح جذر العصب السمعي مرئيا.

أعد تنظيم المرحلة. بعد ذلك ، قم بتدويرها واضبط موضع الشفرة للسمك المطلوب للحافة الرفيعة للشريحة.

حرك الشفرة بعيدا وأعد محاذاة المرحلة إلى موضعها السابق. الآن ، قم بتقطيع الدماغ إلى شكل إسفين ، أكثر سمكا من جانب وأرق على الجانب الآخر.

يشتمل الجانب السميك على جذر العصب السمعي ، بينما يتميز الجانب الرقيق بالخلايا العصبية السمعية المترابطة.

ابدأ باستخدام شفرة حلاقة لقطع الجلد عند خط الوسط للجمجمة من الأنف إلى مؤخرة الرقبة. قشر الجلد للخلف لكشف الجمجمة ، وبدءا من قاعدة الجمجمة واستمر نحو الأنف ، استخدم مقصا صغيرا لعمل شق في الجمجمة عبر خط الوسط.

في خياطة لامدا ، قم بعمل جروح في الجمجمة من خط الوسط بشكل جانبي باتجاه الأذن على كلا الجانبين لتقشير الجمجمة لكشف الدماغ. بدءا من الطرف المنقاري ، استخدم ملعقة مختبرية صغيرة لرفع الدماغ برفق من الجمجمة للسماح بقطع الأعصاب البصرية.

استمر في عمل الدماغ برفق للخلف ، وتعريض السطح البطني ، واستخدم ملقطا دقيقا لقرص الأعصاب ثلاثية التوائم بعناية بالقرب من السطح البطني لجذع الدماغ لقطعها. ضع المستحضر في طبق بتري زجاجي مملوء بمحلول تقطيع بارد ، وضع الطبق تحت مجهر تشريح. تقليم الأعصاب الوجهية بالقرب من جذع الدماغ لكشف الأعصاب الدهليزية القوقعية.

استخدم ملقطا دقيقا لدفع الأطراف إلى الثقبة حيث يخرج العصب الدهليزي القوقعي من الجمجمة إلى أقصى حد ممكن. قرصة لقطع الأعصاب على كلا الجانبين ، تاركا جذر العصب متصلا بجذع الدماغ.

قم بإزالة السحايا والأوعية الدموية من السطح البطني لجذع الدماغ بالقرب من الجسم شبه المنحرف. بعد ذلك ، اضغط على الأعصاب القحفية والأنسجة الضامة المتبقية لتحرير الدماغ تماما من الجمجمة ، مع الحرص على الحفاظ على الحبل الشوكي المتبقي ، إن أمكن.

لإعداد سطح الدماغ للتثبيت على المسرح ، ضع الجانب البطني للدماغ لأعلى ، واستخدم أداة حادة لشل حركة الحبل الشوكي برفق لتثبيت أنسجة المخ. أدخل ملقطا مفتوحا بزاوية 20 درجة تقريبا عبر الدماغ إلى قاع الطبق بحيث تخرج الأطراف من السطح الظهري للدماغ الذيلية إلى التصلب البصري ، واستخدم شفرة حلاقة لقطع الملقط.

بعد ذلك ، قم بإعداد كتلة سنتيمتر مكعب واحد من أجار 4٪ وانشر قطرة صغيرة من الغراء في مستطيل على المسرح. استخدم الملقط لرفع الدماغ بعناية وامسح السائل الزائد برفق بحافة منشفة ورقية. بعد ذلك ، ضع السطح المسدود على الغراء بحيث يكون السطح البطني مواجها لاتجاه الشفرة أثناء التقطيع ، وادفع كتلة الأجار برفق على السطح الظهري كدعم.

للحصول على شرائح إسفين مع جذر العصب القوقعي على الجانب السميك والخلايا العصبية الإنسية ، والخلايا العصبية قليلة القوقعة ، والنواة الإنسية للجسم شبه المنحرف على الجانب الرفيع ، ضع القرص المغناطيسي مع الدماغ المرفق على حامل المسرح ، وضع الحامل في غرفة التقطيع في الاهتزاز مع السطح البطني للدماغ موجه نحو الشفرة. املأ الحجرة بمحلول تقطيع مثلج وقم بخفض الشفرة في محلول فقاعات الكربوجين.

قطع شرائح الذيلية إلى المنطقة ذات الاهتمام للتأكد من أن الشرائح متماثلة. ثم قم بتحويل المرحلة حوالي 15 درجة إلى جانب واحد. استمر في التقطيع بعناية حتى يقترب جذر العصب السمعي من السطح على جانب واحد ويمكن رؤية العصب الوجهي على سطح الجانب الآخر من الشريحة.

قم بتحويل المرحلة 15 درجة إلى الموضع الأصلي ، وحرك الشفرة بعيدا عن الأنسجة. قم بتدوير قاعدة المرحلة 90 درجة بحيث تكون الحافة الجانبية للجانب الرفيع تواجه الشفرة ، وقم بخفض الشفرة بعدة مئات من الميكرونات قبل تقريب الشفرة ببطء من حافة الأنسجة. مع تراجع الشفرة قليلا ، اخفض الشفرة إلى السماكة المطلوبة للحافة الرقيقة للشريحة.

حرك الشفرة للخلف من الأنسجة وقم بتدوير قاعدة المرحلة للخلف بحيث يواجه السطح البطني قاعدة المرحلة. قم بعمل قطع لتعيين السطح المنقاري لشريحة الإسفين ، وانقل الشريحة إلى قطعة من ورق الواجهة مساحتها سنتيمترا مربعا واحدا. السطح الذيلية لأسفل.

يجب أن يكون العصب الوجهي مرئيا على نصفي الكرة الأرضية من الشريحة على السطح المنقاري. ثم انقل الشريحة إلى غرفة حضانة 35 درجة مئوية للتعافي لمدة 30 دقيقة.