موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:06 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بإضافة الخلايا العصبية إلى وسط مناسب في طبق الثقافة.
أضف الجسيمات النانوية المغناطيسية الفلورية ، أو MNPs ، التي تحتوي على نواة مغناطيسية موسومة بصبغة فلورسنت.
أثناء الحضانة ، تأخذ الخلية MNP من خلال الالتقام الخلوي وتصبح ممغنطة.
ضع ركيزة نظيفة ممغنطة منقوشة في طبق ثقافة. تحتوي هذه الركيزة الزجاجية على أنماط هندسية مدمجة ذات خصائص مغناطيسية.
تعقيم الركيزة عن طريق تعريضها للأشعة فوق البنفسجية.
قم بتغطية الركيزة بالكولاجين لتعزيز ارتباط الخلايا.
أضف الخلايا المحملة ب MNP إلى الركيزة واحتضنها.
يجذب المجال المغناطيسي الخارجي للركيزة الخلايا المحملة ب MNP ، مما يتيح ارتباطها.
أضف وسيطا يحتوي على عامل نمو معين على فترات منتظمة.
يساعدعامل النمو الخلايا في تكوين الامتدادات ، بينما يوجه النمط المغناطيسي للركيزة اتجاه هذه الامتدادات.
بذرة 1 مليون خلية في طبق عادي غير مغلف 35 ملم. أضف الحجم المحسوب لتعليق MNP ووسط التمايز إلى الطبق لتحقيق تركيز MNP المطلوب. امزج الخلايا ، MNPs ، ووسط التمايز ، ثم احتضن الطبق في حاضنة مرطبة بثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
نظف الركيزة المزخرفة بنسبة 70٪ من الإيثانول ، وضعها في طبق ثقافة 35 ملم في الغطاء. ضع مغناطيسا كبيرا أسفل الركيزة المزخرفة لمدة دقيقة واحدة ، ثم قم بإزالته عن طريق تحريك الطبق لأعلى وبعيدا ، وإخراج المغناطيس من الغطاء. قم بتشغيل الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة.
لتحضير ركيزة زجاجية مطلية بالكولاجين ، قم بتخفيف الكولاجين من النوع الأول بنسبة 1 إلى 50 في 30٪ إيثانول. قم بتغطية الزجاج بالمحلول. اترك الطبق مكشوفا في الغطاء لمدة أربع ساعات حتى يتبخر كل المحلول. ثم اغسله ثلاث مرات في PBS معقم. قم بإزالة الخلايا من الحاضنة. قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية لمدة 5 دقائق عند 200 جم وتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في 1 مليلتر من وسط التمايز الطازج ، وعد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم.
قم بزرع 105 خلايا فوق الركيزة في طبق استزراع 35 ملم ، وأضف 2 مل من وسط التمايز. احتضان المزرعة في حاضنة مرطبة بثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية. بعد 24 ساعة ، أضف 1 إلى 100 بيتا NGF الفئران الطازج إلى الخلايا. جدد وسط التمايز وأضف بيتا NGF الطازج كل يومين.