JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:56 د • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة متعددة الآبار مطلية بمصفوفة غشاء قاعدية تتضمن بوليمرات خارج الخلية وبروتينات الالتصاق.
قم بزرع الآبار بتعليق أحادي الخلية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في وسط نمو يحتوي على مثبط رو-كيناز.
احتضان للسماح بربط الخلايا الجذعية بالمصفوفة.
تمتص الخلايا المثبط الذي يمنع إنزيمات رو كيناز ويمنع موت الخلايا المبرمجة.
هذا يعزز بقاء الخلايا ويحافظ عليها في حالة غير متمايزة.
استبدل وسط النمو بوسط تحريض عصبي غني بعوامل النمو ويحتوي على مثبطات تستهدف مستقبلات ALK محددة.
تتفاعل هذه المثبطات مع مستقبلاتها وتمنع مسارات إشارات BMP و TGF-β ، مما يمنع تمايز الخلايا إلى سلائف الأديم الباطن أو الأديم المتوسط.
هذا يؤدي إلى التمايز الانتقائي للخلايا الجذعية إلى سلائف الأديم الظاهر.
تستخدم سلائف الأديم الظاهر هذه العناصر الغذائية وعوامل النمو من الوسط لتتكاثر وتتمايز لاحقا إلى خلايا سلفة عصبية.
قم بوضع الخلايا على مصفوفة غشاء قاعدية مطلية بلوحة 6 آبار بكثافة 2 × 105 خلايا لكل بئر في 2 مل من mTeSR1 مع 10 مثبطات ROCK ميكرومولار. بعد 24 ساعة ، استبدل وسط المزرعة بوسط الحث العصبي المكمل ب 1 دورسومورفين ميكرومولار و 5 ميكرومولار SB431542. قم بتغيير الوسيط كل يومين خلال الأيام الأربعة الأولى من الحث العصبي ، ثم كل يوم ، حتى يتم الوصول إلى التقاء في اليوم السابع.