عزل واستزراع الخلايا الدبقية الصغيرة من أدمغة الفئران باستخدام وسائط خالية من المصل
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 8:59 دقيقة • July 8th, 2025
خذ دماغ الفئران المنغمر. افرمه إلى أجزاء صغيرة.
تجانس الأنسجة في مخزن مؤقت لتحرير الخلايا ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة.
بمجرد أن يستقر النسيج غير المهضوم ، اجمع الخلايا التي تحتوي على المادة الطافية وأضف عازلة لفصل المايلين.
امزج المحتويات وأجهزة الطرد المركزي لفصل الخلايا عن المايلين والحطام. قم بإزالة طبقة حطام المايلين والمادة الطافية.
أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت والماصة لفصل الكتل.
مرر التعليق عبر مصفاة لإزالة مجاميع الخلايا المتبقية.
انقل الخلايا المفلترة إلى لوحة مزرعة مغطاة بأجسام مضادة وحيدة النسيلة خاصة بالخلايا الدبقية الصغيرة. احتضان لتسهيل التصاق الخلايا الدبقية الصغيرة.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الخلايا غير الملتصقة. أضف التربسين واحتضنه لتفكيك الخلايا الدبقية الصغيرة.
إزالة التربسين.
أضف وسائط خالية من المصل. احتضان على الجليد لإضعاف تفاعلات الخلايا والركيزة.
ماصة وجمع التعليق في أنبوب. جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية.
أعد تعليق الخلايا الدبقية الصغيرة في وسائط خالية من المصل وانقلها إلى صفيحة متعددة الآبار مطلية بالكولاجين. احتضان لتسهيل التصاق الخلايا الدبقية الصغيرة.
أضف وسائط تحتوي على عوامل النمو والدهون. احتضان لنضج الخلايا الدبقية الصغيرة.
بعد جمع الأدمغة في DPBS بارد ، قم بتقطيع كل دماغ إلى قطع بحجم مكعب واحد ملليمتر في طبق بتري على الجلي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية