تحضير أقسام الدماغ باستخدام طريقة التعافي الوقائية القائمة على NMDG
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:59 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بدماغ معزول. اغمر الدماغ بسرعة في سائل دماغي نخاعي اصطناعي مبرد مسبقا أو aCSF لإيقاف عمليات التمثيل الغذائي مؤقتا.
يحتوي aCSF على NMDG ، وهو كاتيون عضوي كبير يقلل من إصابة الخلايا العصبية وموتها.
يحتويaCSF أيضا على HEPES ، الذي يحافظ على تركيز الأس الهيدروجيني والملح ويمنع تورم الخلايا وتلفها.
انقل الدماغ إلى طبق بتري يحتوي على ورق ترشيح.
تقليم الدماغ للحصول على المنطقة المطلوبة.
قم بإصلاح كتلة الدماغ في حامل العينة باستخدام غراء مناسب وقم بتضمينه في الاغاروز.
ضع حامل العينة في آلة التقطيع.
املأ خزان آلة التقطيع ب aCSF المبرد مسبقا وقم بتهوية المحلول لضمان إمداد الأكسجين الأمثل.
الحصول على أقسام من كتلة الدماغ.
انقل الأقسام إلى aCSF الدافئ مسبقا لإعادة تشغيل عمليات التمثيل الغذائي ، مما يمكن الأقسام من التعافي.
استخرج الدماغ السليم برفق في دورق NMDG-HEPES aCSF المبرد مسبقا واترك الدماغ يبرد بشكل موحد لمدة دقيقة واحدة تقريبا. الآن ، استخدم ملعقة كبيرة لنقل الدماغ من الدورق إلى طبق بتري ، مغطى بورق الترشيح.
قم بقص الدماغ وتركيبه ، وفقا لزاوية التقطيع المفضلة ومنطقة الدماغ المطلوبة ذات الاهتمام. اعمل بسرعة لتجنب الحرمان من الأكسجين لفترات طويلة أثناء المناولة. بعد ذلك ، قم بلصق كتلة الدماغ على حامل العينة باستخدام الغراء اللاصق.
اسحب القطعة الداخلية لحامل العينة لسحب كتلة الدماغ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية