عزل واستزراع الخلايا الجذعية العصبية البالغة من منطقة الفأر تحت الثفني

ابدأ بدماغ فأر على مصفوفة دماغية مبردة.

الحصول على الأقسام التي تحتوي على المنطقة تحت الكالوسال أو SCZ. انقل القسم إلى مخزن مؤقت للفوسفات البارد.

تحت مجهر تشريح ، قم بقص جزء SCZ.

يقطع SCZ المفصل إلى قطع أصغر.

انقل هذه القطع إلى عازلة للهضم. احتضان لفصل الخلايا عن الأنسجة.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في وسط مناسب.

انقل الخلايا إلى لوحة مزرعة وأضف عوامل نمو محددة.

تنقسم الخلايا الجذعية العصبية البالغة ، وتشكل مجموعات تسمى المجالات العصبية.

يحد التوزيع غير السليم للمغذيات في مجموعات الخلايا من نمو الخلايا.

لتفريق العناقيد ، قم بأجهزة الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية. قم بإعادة تعليق المجموعات في مخزن مؤقت للتفكك واحتضانه.

قم بعرض المحلول لأعلى ولأسفل لتوليد خلايا مفردة.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

قم بتعليق الخلايا ونقلها إلى وسط مناسب للحصول على طبقة أحادية.

بمجرد تشريحها ، انقل دماغ الفأر إلى مخزن PBS البارد ، واشطفه مرتين لإزالة الدم الزائد. بعد ذلك ، ضع الدماغ في مصفوفة الدماغ على الجليد ، وقم بعمل قطع إكلية للحصول على شرائح بسمك ملليمتر واحد. بعد ذلك ، انقل شرائح الدماغ الخلفية التي تحتوي على مناطق SCZ إلى PBS الباردة.

تحت مجهر تشريح بتكبير منخفض ، قم بتشريح SCZ من منطقة المادة البيضاء في القشرة والحصين بإبرة مثنية بمقياس