موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:44 دقيقة • July 8th, 2025
خذ طبقا مزرعيا مغطى بركيزة زراعة الخلايا لتسهيل التصاق الخلايا.
يحتوي الطبق على ملحق ثقافة بئر واحد بدون قاعدة متصلة بمركزه ، مما يخلق مقصورة محددة. يتم وضع علامة على الخطوط العريضة لهذه المقصورة على الطبق لمراقبة هجرة الخلايا.
أدخل معلقا خلويا في المقصورة التي تحتوي على الخلايا البطانية حول البطينين أو PVECs ، والخلايا المبطنة للأوعية الدموية في الدماغ ، والخلايا العصبية الداخلية التي تهاجر على طول PVECs أثناء نمو الدماغ.
أضف وسيطا للزراعة المشتركة إلى الطبق للحفاظ على الرطوبة ، واحتضانه لتسهيل التصاق الخلايا بالركيزة.
قم بإزالة الملحق لإزالة الحاجز المادي ؛ قم بتحديث الوسيط ، واحتضانه مرة أخرى.
تتكاثر PVECs ، مما يوسع شبكة الخلايا البطانية خارج حدود الإدخال.
تفرز PVECs العوامل التي تعمل كإشارات إرشادية ، وتوجه الخلايا العصبية الداخلية للهجرة على طول شبكة PVEC.
الثقافة المشتركة التي تعرض هجرة الخلايا العصبية الداخلية جاهزة للتحليل.
لإجراء فحص الزراعة المشتركة ، قم بتعليق 30,000 خلية عصبية داخلية GABAergic و 30,000 خلية بطانية بشرية حول البطينين في 70 ميكرولترا من وسط الزراعة المشتركة. بعد ذلك ، قم بزرع محلول الخلية هذا داخل حجرة إدخال بئر واحدة. بعد 48 ساعة ، قم بإزالة الحشوة. احتضان الاستزراع المشترك عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة خمسة أيام.