$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ضع مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية ، أو MEA ، في طبق بتري تحت مجهر مجسم. تتكون MEA من أقطاب كهربائية مرتبة في شبكة مع منطقتين منفصلتين.
أضف قطرة من بلازما الدم إلى منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا. ضع شريحتين من الحبل الشوكي تم الحصول عليهما من أجنة الفئران ، بحيث يكون جانبهما البطني مواجها لبعضها البعض.
أدخل محلول الثرومبين ، واخلطه مع البلازما ، واحتضانه. يتسبب الثرومبين في تخثر البلازما ، مما يخلق سقالة بيولوجية تسهل التصاق الشرائح في منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا.
أضف وسيطا مغذيا واحتضنه تحت التحريض ، مما يعزز تكوين الروابط الخلوية بين الشرائح ويسبب اندماجها.
تحت المجهر المجسم ، أدخل آفة عن طريق قطع وصلات الأنسجة بين الشرائح. أضف وسيطا غذائيا واحتضنه.
أثناء الحضانة ، تنمو الخلايا العصبية عبر الآفة لتوصيل الشرائح.
باستخدام غرفة التسجيل ، قم بتسجيل النشاط الكهربائي من شريحتي الحبل الشوكي لتقييم توصيلاتهما الوظيفية المتجددة.
ضع طبق بتري مع مصفوفة قطب كهربائي صغير مطلي بالداخل ، تحت مجهر مجسم. اجعل المصفوفة في بؤرة التركيز وقم بتوسيط قطرة 6 ميكرولتر من بلازما الدجاج على مجموعة الأقطاب الكهربائية. باستخدام ملعقة صغيرة ، حرك قسمين من الحبل الشوكي بحذر بحيث يكون جانبهما البطني مواجها لبعضهما البعض في قطرة البلازما.
بعد ذلك ، أضف 8 ميكرولترات من الثرومبين حول قطرة بلازما الدجاج. بعد ذلك ، استخدم طرف الماصة لخلط ونشر خليط بلازما الدجاج والثرومبين بعناية. قبل أن يصبح خليط بلازما الدجاج والثرومبين خيطيا جدا ويبدأ في التخثر ، استنشق السائل الزائد. ثم غطي طبق بتري وضعيه في غرفة رطبة. ضع الغرفة داخل حاضنة على حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة تقريبا.
بعد الحضانة ، أضف بعناية 10 ميكرولتر من وسط المغذيات إلى العينة. غطي طبق بتري وضعيه مرة أخرى في الحاضنة لمدة 45 دقيقة إضافية. بعد ذلك ، ضع كل مجموعة من مجموعات ثقافة المصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية في أنبوب أسطواني ، وأضف 3 ملليلتر من وسط المغذيات. أغلق الغطاء بإحكام ، ثم ضع أنبوب الأسطوانة في أسطوانة الأسطوانة. قم بتدوير الأسطوانة بسرعة 1 إلى 2 دورة في الدقيقة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية.
باستخدام ملقط معقم ذو رؤوس مطاطية ، قم بإزالة مجموعات ثقافة المصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية من أنبوب الأسطوانة وضعها في طبق بتري تحت مجهر مجسم. اجعل الأنسجة في بؤرة التركيز وتحقق من اندماج الشريحتين.
بعد ذلك ، أمسك التجميع بثبات وضع شفرة مشرط في أخدود مجموعة الأقطاب المتعددة بالقرب من شرائح الأنسجة. أمسك المشرط أفقيا إلى حد ما ، ثم ارفع مقبض المشرط لأعلى ، لكن اترك شفرة المشرط تبقى في أخدود المصفوفة بحيث تتدحرج الشفرة من القاعدة إلى الحافة ، وتقطع الأنسجة التي تغطي الأخدود. اقطع أي وصلات أنسجة متبقية بطرف إبرة قياس 25 إذا لزم الأمر. اعمل فقط في المنطقة الموجودة داخل الأخدود ، ولا تلمس حواف العطاء.
ضع مجموعات ثقافة المصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية مرة أخرى في أنبوب الأسطوانة وأضف 3 ملليلتر من وسط المغذيات الطازجة إلى الثقافات. ثم ضع أنبوب الأسطوانة مرة أخرى على أسطوانة الأسطوانة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية.
قم بتركيب مجموعة ثقافة مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية في غرفة التسجيل وقم بتطبيق حوالي 500 ميكرولتر من المحلول خارج الخلية على المصفوفة. ثم قم بتركيب التجميع على المجهر. انتظر 10 دقائق حتى يستقر النظام ثم سجل النشاط التلقائي الأساسي من كل من أقطاب الكشف عن النشاط لمدة 10 دقائق.