موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:46 دقيقة • July 8th, 2025
بذور الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان, أو iPSCs, في مفاعل حيوي. يتم تعليق iPSCs في وسائط تحتوي على مثبط موت الخلايا المبرمج الخلوي.
تحت المجال المغناطيسي ، تدور العجلة الرأسية للمفاعل الحيوي بسرعة مضبوطة ، مما يسهل الاتصال بين الخلية والخلية وتكوين الكتل. قم بإزالة معظم الوسائط وإضافة وسائط جديدة بدون مثبط.
استمر في الزراعة. بمجرد أن تصل الركام إلى الحجم الأمثل ، اسمح لها بالاستقرار عن طريق الجاذبية. قم بإزالة الوسيط.
أضف وسائط التمايز التي تحتوي على عوامل النمو ، والثقافة مع انخفاض سرعة عجلة المفاعل الحيوي. تعزز عوامل النمو التمايز العصبي داخل المجاميع.
بعد ذلك ، أضف وسطا جديدا مكملا بعوامل النمو والكيموكينات التي تحفز على نمو أسلاف المخيخ.
تدريجيا ، تنظم أسلاف المخيخ في طبقات مميزة داخل الركام ، وتشكل عضيات مخيخية مبكرة.
أخيرا ، أضف وسيطا عصبيا يحتوي على عوامل تغذية عصبية محددة.
تحفز هذه العوامل نضوج السلف المخيخي في الخلايا العصبية المخيخية الوظيفية النشطة متشابك ، مما يؤدي إلى توليد عضيات ناضجة.
في اليوم 1 ، مع كون اليوم 0 هو يوم بذر المفاعل الحيوي ، ضع المفاعل الحيوي والوحدة الأساسية في غطاء تدفق معقم. بعد ذلك ، استخدم ماصة مصلية لجمع عينة سعة 1 مليلتر من معلق الخلية. ضع تعليق الخلية في لوحة مرفقة منخفضة للغاية 24 بئرا. استخدام المجهر للتأكد من أن المجاميع المشتقة من iPSC قد تشكلت. إذا كان الأمر كذلك، فالتقط صورا للمجاميع بمعدل 40x أو 100x.
استمر في زراعة iPSCs في المفاعل الحيوي حتى يكون متوسط قطر الركام 100 ميكرومتر. بعد ذلك ، استبدل 80٪ من الوسط ب mTesR1 الطازج بدون مثبط ROCK. عندما يصل قطر الركام إلى 200 إلى 250 ميكرومتر ، دع جميع العضيات تستقر في قاع المفاعل الحيوي. ثم استبدل كل الوسط المستهلك بوسيط تمايز gfCDM.
ضع الوحدة الأساسية والمفاعل الحيوي في الحاضنة وقلل التحريك إلى 25 دورة في الدقيقة.