إنشاء ثقافة ثلاثية الأبعاد للخلايا الدبقية المشتقة من دماغ الفئران

خذ صفيحة دقيقة مع ثقافة ملتصقة للخلايا الدبقية المشتقة من دماغ الفئران. تحتوي الثقافة على الخلايا النجمية والخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا الدبقية قليلة التغصن.

قم بإزالة الوسط ، واحتضانه بمحلول إنزيم لفصل الخلايا ، ثم انقلها إلى أنبوب.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية بالحطام الخلوي. أعد تعليق الخلايا في وسط دافئ.

قم بعمل ثلاثية باستخدام حقنة لتفتيت كتل الخلايا والتصفية باستخدام مصفاة للحصول على تعليق أحادي الخلية.

أضف بوليمر حيوي قابل للربط الضوئي ، وعوامل تشابك ، ومكونات مصفوفة خارج الخلية.

يسكب المزيج في قالب متصل بغطاء. قم بتعريض الخليط لضوء عالي الكثافة للحث على التشابك ، وتشكيل هلام وتغليف الخلايا الدبقية.

قم بإزالة القالب وضع الغطاء في صفيحة دقيقة. أضف وسيطا دافئا واحتضن الجل في ظل الظروف الفسيولوجية.

تتكاثر الخلايا داخل المصفوفة الداعمة خارج الخلية وإنشاء شبكة خلوية ، مما يؤدي إلى إنشاء ثقافة ثلاثية الأبعاد للخلايا الدبقية.

قبل 24 ساعة من تغليف الخلية ، استنشق الوسط من الثقافات الأولية لمدة أسبوعين ، وأضف 1 مليلتر من الوسط الطازج إلى كل بئر. في يوم تغليف الخلايا ، قم بإعداد 12.5 مل من التربسين المخفف و 25 مل من الوسط لكل طبق مكون من 12 بئرا ، وقم بتسخينه إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي. بعد ذلك ، استخدم ماصة مصلية سعة 10 مليلتر لإضافة حوالي 1 مليلتر من التربسين الم