موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:16 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار مغطاة بمصفوفة خارج الخلية ، أو ECM.
في آبار منفصلة ، أدخل الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات غير المعدلة وراثيا ، أو hPSCs ، في وسط الاستزراع.
تحملhPSCs المعدلة وراثيا جينا معدلا تحت مروج محفز للمضادات الحيوية. يقوم الجين المعدل بتشفير عامل النسخ الذي يحفز التمايز العصبي.
احتضان لتسهيل التصاق الخلية بوحدة التحكم في المركز. تمنع الجزيئات الصغيرة في الوسط موت الخلايا المبرمج ، مما يعزز تكاثر الخلايا.
أضف محلول انفصال لفصل الخلايا ؛ أضف الوسيط لوقف التفكك ، ثم انقلها إلى صفيحة دقيقة أخرى مطلية ب ECM للسماح بتكاثر الخلايا.
أدخل وسيط تمايز عصبي يحتوي على جزيئات صغيرة على الخلايا غير المعدلة وراثيا والمضاد الحيوي المحفز على الخلايا المعدلة وراثيا.
تحفز الجزيئات الصغيرة الخلايا غير المعدلة وراثيا على التمايز إلى خلايا سلفية عصبية أو NPCs. في الخلايا المعدلة وراثيا ، ينشط التعبير الناجم عن المضادات الحيوية لعامل النسخ الجينات المطلوبة للتمايز إلى الشخصيات غير القابلة للعب.
الحفاظ على الشخصيات غير القابلة للعب في الثقافة للتطبيقات النهائية.
لتوليد أسلاف الخلايا العصبية غير المعدلة وراثيا والخلايا العصبية ، أو hNeurons ، انظر اليوم 14 الأسلاف العصبية المشتقة من hPSC في صفائح ستة آبار مطلية ب ECM مع 2 مل من الوسط العصبي و Y27632 لكل بئر.
إذا كنت تعمل مع iNeurons المحفزة للدوكسيسيكلين ، فأضف وسيطا عصبيا يحتوي على الدوكسيسيكلين عندما تكون الخلايا ملتقية بنسبة 35٪ للحث على التمايز وتنشيط التعبير الجيني. بعد يومين ، قم بتغذية الخطوط المعدلة وراثيا وغير المعدلة وراثيا ب 2 ملليلتر من الوسائط العصبية لكل بئر في اليوم. استمر حتى تصبح الخلايا جاهزة للرفع عند التقاء 70٪.