توليد سلائف الخلايا العصبية الداخلية القشرية من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر

خذ الخلايا الجذعية الجنينية للفأر المعلقة في وسائط خالية من المصل تحتوي على مثبطات جزيئات صغيرة.

قم بزرع الخلايا على صفيحة ثقافة غير ملتصقة ، مما يسمح لها بالتكاثر والتجمع لتشكيل أجسام جنينية ثلاثية الأبعاد أو EBs.

بالإضافة إلى ذلك ، تمنع المثبطات مسارات الإشارات غير العصبية وتحفز تمايز الخلايا الجذعية الجنينية نحو المصير العصبي القشري.

انقل EBs إلى أنبوب ، وجهاز طرد مركزي ، وقم بإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق EBs في محلول يحتوي على كوكتيل إنزيم و DNase.

تقوم

الإنزيمات بفصل EBs إلى خلايا مفردة ، بينما يتحلل DNase الحمض النووي الملوث.

أضف وسائط خالية من المصل تحتوي على مثبطات لإيقاف النشاط الأنزيمي ، ثم قم بالطرد المركزي وإزالة المادة الطافية المحتوية على الإنزيمات.

أعد تعليق الخلايا في وسائط تحتوي على مثبطات جزيئات صغيرة ونقلها إلى ألواح مزرعة مغلفة بعوامل الالتصاق.

تلتصق الخلايا بسطح اللوحة المطلي.

تمنع المثبطات موت الخلايا المبرمج وتحفز التمايز الخلوي إلى أسلاف الخلايا العصبية الداخلية القشرية.

ابدأ في زراعة الخلايا كأجسام جنينية عن طريق إضافة 75,000 خلية لكل مليلتر في وسائط KSRN2 في أطباق زراعة الأنسجة غير الملتصقة واحتضانها عند 37 درجة مئوية. في DD1 ، استعد لهبوط الخلايا عن طريق طلاء الأطباق المعالجة بزراعة الأنسجة ب poly-L-lysine لمدة ساعة واحدة على الأقل أو بين عشية وضحاها ع