توليد الأسلاف العصبية من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر بطريقة القطرة المعلقة

خذ تعليق الخلايا الجذعية الجنينية للفأر.

أجهزة الطرد المركزي ، وإزالة المادة الطافية ، وإعادة تعليق الخلايا في وسط التمايز العصبي.

ضع قطرات من التعليق على الجانب الداخلي من غطاء لوحة الزيادة.

أضف حاجزا إلى اللوحة السفلية لمنع القطرات من الجفاف. ضع الغطاء على اللوحة السفلية ، وشكل ثقافة قطرة معلقة ، واحتضنها.

بسبب الجاذبية ، تتجمع الخلايا وتشكل مجاميع ثلاثية الأبعاد تسمى الأجسام الجنينية أو EBs.

ضع القطرات في صفيحة تحتوي على وسط التمايز واحتضانها تحت التحريض لنمو EBs.

جهاز الطرد المركزي وإزالة الوسيط ؛ قم بتعليق EBs في وسط التمايز المكمل بحمض الريتينويك ، ونقلها إلى لوحة الثقافة ، واحتضنها.

يدخل حمض الريتينويك إلى الخلايا ويؤدي إلى تكوين مركب نسخ. يحفز المركب التعبير الجيني ، مما يؤدي إلى التمايز إلى خلايا سلفية عصبية.

EBs المتباينة جاهزة للتطبيقات النهائية.

ابدأ بإعداد ثقافة الخلايا المتساقطة المعلقة. بالنسبة للوحة زراعة الخلايا التي يبلغ طولها 10 سم ، اضبط التركيز على 500 خلية لكل 20 ميكرولتر من وسط التمايز. قم بإعداد تعليق خلوي كاف ل 50 قطرة سعة 20 ميكرولتر. استخدم ماصة دقيقة أو ماصة مكررة لوضع قطرات سعة 20 ميكرولترا من معلق الخلية على غطاء لوحة زراعة الأنسجة، مع التأكد من أن القطرات ليست قريبة جدا من بعضها البعض لمنعها من الاندماج.

املأ الطبق ب 5 إلى 10 ملليلتر من PBS ، ثم أعد ا