إسكات الجينات بوساطة siRNA في الخلايا الجذعية العصبية

خذ الحمض النووي الريبي الصغير المتداخل ، أو siRNA ، وهو نوع من الحمض النووي الريبي يشارك في إسكات الجينات.

أضف حويصلات دهنية كروية تسمى الجسيمات الشحمية.

يغلف الجسيم الشحمي siRNA ، ويحميه من التدهور.

أضف مجمعات siRNA-liposome إلى مزرعة تحتوي بشكل جيد على الخلايا الجذعية العصبية. احتفظ بواحد جيدا كعنصر تحكم ، واحتضن.

يندمج الجسيم الشحمي مع غشاء الخلية ، ويطلق siRNA.

يرتبط siRNA بمركب الإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي ، أو RISC ، حيث تتم إزالة خيط واحد.

يستهدف الخيط المتبقي mRNA المسؤول عن تمايز الخلايا ، مما يؤدي إلى تدهوره.

أضف وسيط تمايز مناسب إلى الآبار.

في بئر التحكم ، تعزز عوامل النمو والعناصر الغذائية الأخرى في الوسط تمايز الخلايا الجذعية العصبية إلى بانيات العظم.

باستخدام تقنيات التلوين المناسبة ، قم بتلطيخ العلامات الخاصة بانيات العظم على الخلايا وصمة عار النواة بصبغة فلورية زرقاء.

يشير عدم وجود علامات خاصة بانيات العظم في الخلايا الصامتة الجينات إلى عدم قدرتها على التمايز.

لأداء ضربة قاضية siRNA في O9-1 الخلايا استعادة الخلايا وبذرها. خفف الجسيمات الشحمية في حجم مناسب من الوسائط الخالية من المصل. بعد ذلك ، قم بتخفيف siRNA في الوسائط الخالية من المصل وفقا لبروتوكول النص. بعد ذلك ، أضف siRNA المخفف إلى الجسيمات الشحمية المخففة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. امزج المحلول عن طريق سحب العينات واحتضانه لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد ذلك ، أضف حجما مناسبا من مركب siRNA-lipid إلى الخلايا. ثم احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة في حاضنة زراعة الخلايا القياسية. يمكن أن تتمايز خلايا O9-1 إلى أنواع مختلفة من الخلايا في ظل ظروف ثقافة تمايز محددة. لتفريق خلايا O9-1 إلى بانيات العظم ، قم بإعداد وسائط تمايز العظم وفقا لبروتوكول النص. أخيرا ، اكتشف علامة بانيات العظم أوستيوكالسين في بانيات العظم المتمايزة عن طريق التلوين المناعي.