عزل مستعمرات الخلايا السلفية العصبية المستحثة المشتقة من الخلايا الليفية البشرية البالغة

ابدأ بثقافة ملتصقة لمستعمرات الخلايا السلفية العصبية المستحثة المشتقة من الخلايا الليفية البشرية البالغة في صفيحة متعددة الآبار المغلفة باللامينين.

اغسل المستعمرات بمخزن مؤقت لإزالة الخلايا غير الملتصقة ، ثم أضف عازلة جديدة.

اكشط حول المستعمرات الفردية لإزالة الخلايا المحيطة.

انقل المستعمرات إلى آبار طازجة مطلية بطبقة من اللامينين تحتوي على وسط الحث العصبي.

قم بتقسيم المستعمرات ميكانيكيا للحصول على تعليق أحادي الخلية.

يتفاعل Laminin ، وهو بروتين مصفوفة خارج الخلية ، مع البروتينات السطحية للأسلاف ، مما يسهل التصاق الخلية بسطح البئر.

أضف مثبطا جزيئيا صغيرا يدخل الخلايا ويمنع كينازات البروتين المحددة ، مما يمنع موت الخلايا المبرمج الخلوي.

تسهل عوامل النمو والجزيئات الصغيرة الموجودة في وسط الحث العصبي تكاثر الأسلاف.

استبدل الوسيط بشكل دوري لتجديد العناصر الغذائية ، مما يسهل استمرار انتشار السلف.

تشير الثقافة المتقاربة ، أو طبقة الخلية المغطاة بالكامل ، إلى التوسع الناجح للخلايا السلفية العصبية المستحثة.

بعد يوم واحد ، قم بشفط اللامينين من الألواح ، وأضف 200 ميكرولتر من وسط الحث العصبي إلى الآبار. اغسل الألواح المكونة من ستة آبار التي تحتوي على المستعمرات المراد قطفها ، مرة واحدة باستخدام DPBS ، قبل إضافة 2 مل من وسط الحث العصبي لكل بئر من صفيحة من ستة آبار.

اختر الخلايا ميكانيكيا عن طر