توليد ثقافة عصبية منخفضة الكثافة للغاية باستخدام طبقة تغذية عصبية عالية الكثافة

ابدأ بطبقتين متعددي الآبار: إحداهما ذات قاع محفور مطلي ببوليمر والأخرى تتميز بغطاء مطلي بالبوليمر.

قم بزرع معلق عالي الكثافة للخلايا العصبية الجنينية في الصفيحة ذات القاع المحفور. أضف تعليق الخلايا العصبية منخفض الكثافة للغاية إلى الغطاء الذي يحتوي على البئر.

احتضان للسماح بالارتباط العصبي بالبوليمرات.

قم بإزالة الغطاء وضعه فوق ثقافة الخلايا العصبية عالية الكثافة ، مما يمكن الخلايا العصبية من مواجهة بعضها البعض.

يخلق السطح المحفور ذو الهياكل المرتفعة مساحة صغيرة تفصل بين الخلايا العصبية ذات الكثافات المختلفة.

تعمل الثقافة عالية الكثافة كطبقة مغذية وتفرز عامل النمو العصبي.

بسبب مساحة الانتشار الضيقة ، تتراكم عوامل النمو حول الخلايا العصبية ، مما يسهل نموها وتطور الإسقاطات العصبية.

إدخال وسط عصبي قاعدي مع السيتوزين أرابينوسيد الذي يمنع بشكل انتقائي نمو الخلايا غير العصبية.

قم بتجديده بانتظام بوسط عصبي قاعدي جديد للحفاظ على الثقافة العصبية.

في هذا الإجراء ، ضع لوحا من 24 بئرا بقيعان محفورة للخلايا العصبية عالية الكثافة في غطاء المزرعة. قم بإزالة 300 ميكرولتر من الوسط المكيف مسبقا عن طريق الفراغ. ثم ، لوحة 0.6 ملليلتر من تعليق الخلايا عالية الكثافة عند 250,000 الخلايا العصبية لكل مليلتر.

ضع الألواح الأخرى المكونة من 224 بئرا مع أغطية في غطاء الغطاء. قم بإزالة 300 ميكرولتر من الوسط المك