تمايز خط خلايا الورم الأرومي العصبي البشري إلى خلايا عصبية ناضجة

ابدأ بخط خلايا الورم الأرومي العصبي غير المتمايز الذي يتكون من خلايا شبيهة بالخلايا العصبية وشبيهة بالظهارة في وسط عالي التركيز في المصل.

قم بإزالة الوسط وأضف وسط تمايز يحتوي على تركيز منخفض في الدم ، مكمل بحمض الريتينويك.

يمنع الحرمان من المصل تكاثر الخلايا الشبيهة بالظهارة.

يحفز حمض الريتينويك التعبير الجيني العصبي في الخلايا الشبيهة بالخلايا العصبية ، ويحولها إلى نمط ظاهري أكثر تمايزا.

أضف كوكتيل التربسين-EDTA لفصل الخلايا المتمايزة جزئيا.

أضف وسائط تحتوي على بروتينات المصل لمنع التربسين.

قم بوضع الخلايا على لوحة وأدخل وسط تمايز جديدا يحتوي على حمض الريتينويك ومستوى مصل منخفض إضافي.

تستمر الخلايا في تطوير عمليات ممتدة.

أضف التربسين لفصل الخلايا.

بعد ذلك ، أضف وسائط لحجب التربسين ووضع الخلايا على طبق مغطى بالبروتين خارج الخلية لتعزيز الالتصاق الخلوي.

أخيرا ، تكملة مع وسط خال من المصل يحتوي على عوامل نمو الخلايا العصبية.

تحفز هذه العوامل التمايز النهائي إلى الخلايا العصبية الناضجة التي تظهر عمليات عصبية متفرعة واسعة النطاق.

في اليوم صفر ، عد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم. بعد ذلك ، قم بتخفيف تعليق الخلية إلى 50,000 خلية لكل مليلتر باستخدام وسائط النمو الأساسية. لوحة 2 ملليلتر من الخلايا لكل طبق 35 ملم ، ليصبح المجموع 100,000 خلية لكل طبق. بعد ذلك ، ضع الخلايا في الحاضنة عند 37