تمايز الخلايا السلفية العصبية إلى خلايا عصبية

ابدأ بلوحة متعددة الآبار مطلية بالجيلاتين تحتوي على خلايا سلفية عصبية مشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر في وسط تمايز قاعدي غني بالمغذيات.

تستخدم

الخلايا السلفية هذه العناصر الغذائية من الوسائط للحفاظ على صلاحيتها.

احتضن للسماح بربط الخلية بالسطح المطلي بالجيلاتين ، ثم اغسلها لإزالة الخلايا غير المتصلة والحطام.

أدخل وسيطا للتمايز القاعدي مكملا بعامل استقرار ومغذيات إضافية وعوامل نمو عصبية ضرورية لتمايز الخلايا ثم احتضانه.

تستهلك الخلايا السلفية العناصر الغذائية وعوامل النمو ، وتبدأ في تمايزها إلى الخلايا العصبية التي تبدأ في توسيع عملياتها الخلوية.

في الوقت نفسه ، يتفاعل عامل التثبيت مع المستقلبات السامة ويحمي الخلايا العصبية النامية من التلف التأكسدي ، مما يحافظ على صلاحيتها.

استبدل الوسائط بانتظام للحفاظ على مستويات العناصر الغذائية.

بمرور الوقت ، تنضج الخلايا العصبية ، وتطور المحاور - العمليات الخلوية الأطول.

بالإضافة إلى ذلك ، يطورون أيضا التشعبات ، وهي العمليات الخلوية الأقصر ، مما يؤكد تمايز الخلايا الجذعية إلى خلايا عصبية.

قم بزرع حوالي 500,000 مشتقات الخلايا الجذعية الجنينية للفأر في 2 مل من وسط التمايز القاعدي لكل بئر على الألواح المغلفة بالجيلاتين بنسبة 0.1٪. قسم المشتقات بشكل عشوائي إلى ثلاث مجموعات من أجل اختبار ثلاث بروتوكولات تمايز للمرحلة الثانية. احتضن الطبق لمدة ست ساعات. بعد ذلك ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام 2 مل من PBS وأضف 2 مل من وسط التمايز القاعدي ، N2 B27 متوسط 1 ، أو N2 B27 متوسط 2 لكل بئر ، اعتمادا على البروتوكول. ضع الألواح في الحاضنة ، واسمح للخلايا بالتمايز لمدة 10 أيام أخرى ، وتغيير الوسط المقابل كل يومين.