موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:32 دقيقة • July 8th, 2025
أدخل الخلايا الليفية الجلدية البشرية البالغة أو aHDFs ، المعلقة في وسط الخلايا الليفية ، في صفيحة دقيقة مغلفة بالبروتين خارج الخلية. احتضان للسماح بالالتصاق الخلية.
إدخال ناقل الفيروس العسسي المعدل وراثيا. عند استيعاب الخلية المضيفة ، يتم نسخ الحمض النووي الريبي الفيروسي عكسيا إلى الحمض النووي ، والذي يندمج في جينوم المضيف.
يعبر الحمض النووي الفيروسي عن عوامل النسخ والحمض النووي الريبي القصير لدبوس الشعر ، أو shRNAs. تعالج نوكليازات الخلوية shRNAs إلى RNAs صغيرة متداخلة أو siRNAs.
تعمل siRNAs المتولدة على تدهور مثبطات النسخ المشفرة mRNA ، وبالتالي تثبيط تعبيرها وتمكين تنشيط جينات التمايز العصبية.
تعملعوامل النسخ على تنشيط الجينات ، مما يعزز التمايز العصبي ل aHDFs.
قم بإزالة الوسيط الذي يحتوي على المتجهات غير الداخلية.
أضف وسيطا للتحويل العصبي المبكر يحتوي على عوامل النمو والجزيئات الصغيرة التي تحفز التمايز إلى خلايا شبيهة بالخلايا العصبية.
استبدل الوسط بوسط تحويل الخلايا العصبية المتأخرة الذي يحتوي على عوامل التغذية العصبية للنضج إلى خلايا عصبية.
الخلايا العصبية الناضجة جاهزة لإجراء فحوصات المصب.
قم بإعداد معلق خلوي من 1،320،000 خلية في 13.2 مل من وسط الخلايا الليفية من أجل تحقيق 100،000 خلية لكل مليلتر من الوسط. بعد شفط الجيلاتين من اللوحة ، اغسل الطبق بمحلول ملحي Dulbecco المخزن
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية