تطوير نموذج زراعة الخلايا الثلاثية للحاجز الدموي الدماغي البشري

ابدأ بإضافة الحمض إلى الجانب السفلي من إدخال البئر.

قم بتغطية إدراج البئر بلوحة ثقافة واحتضنها.

تلتصق الخلايا الحمضية بغشاء البئر ، وتشكل طبقة أحادية الخلية أو طبقة أحادية.

خذ لوحة ثقافة أخرى.

أضف الخلايا النجمية البشرية إلى البئر في وسط مناسب. ثم احتضن اللوحة.

تلتصق الخلايا النجمية بقاع البئر وتشكل طبقة أحادية.

تخلص من الوسط وأضف الخلايا النجمية الطازجة ووسط الحضج.

الآن ، خذ لوحة الثقافة التي تحتوي على إدراج البئر مع طبقة الحضج.

اقلب اللوحة وانقل البئر إلى البئر الذي يحتوي على طبقة الخلايا النجمية.

أضف الخلايا البطانية للدماغ البشري إلى الجانب العلوي من البئر ، وأدخل واحتضن.

ترتبط الخلايا البطانية بإدخال البئر ، وتشكل نظام ثقافة ثلاثي الخلايا يشبه الحاجز الدموي الدماغي ، وهو واجهة حاسمة تفصل مجرى الدم والدماغ.

ابدأ بزراعة HBVP في قوارير استزراع T75 بسطح نشط للتصاق الخلايا داخل حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية حتى التقاء. بمجرد الوصول إلى التقاء ، استنشق وسط الطفيلي القديم واغسل الخلايا ب 5 ملليلتر من برنامج تلفزيون Dulbecco الدافئ. قم بشفط PBS الخاص ب Dulbecco وافصل الخلايا عن القارورة ، باستخدام مزيج من 4 ملليلتر من محلول التربسين-EDTA الدافئ و 1 مليلتر من Dulbecco's PBS.

احتضان القارورة لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. انظر تحت المجه