تطوير نموذج زراعة الخلايا الثلاثية للحاجز الدموي الدماغي البشري

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأعصاب

0 مشاهدات • 3:44 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بإضافة الحمض إلى الجانب السفلي من إدخال البئر.

قم بتغطية إدراج البئر بلوحة ثقافة واحتضنها.

تلتصق الخلايا الحمضية بغشاء البئر ، وتشكل طبقة أحادية الخلية أو طبقة أحادية.

خذ لوحة ثقافة أخرى.

أضف الخلايا النجمية البشرية إلى البئر في وسط مناسب. ثم احتضن اللوحة.

تلتصق الخلايا النجمية بقاع البئر وتشكل طبقة أحادية.

تخلص من الوسط وأضف الخلايا النجمية الطازجة ووسط الحضج.

الآن ، خذ لوحة الثقافة التي تحتوي على إدراج البئر مع طبقة الحضج.

اقلب اللوحة وانقل البئر إلى البئر الذي يحتوي على طبقة الخلايا النجمية.

أضف الخلايا البطانية للدماغ البشري إلى الجانب العلوي من البئر ، وأدخل واحتضن.

ترتبط الخلايا البطانية بإدخال البئر ، وتشكل نظام ثقافة ثلاثي الخلايا يشبه الحاجز الدموي الدماغي ، وهو واجهة حاسمة تفصل مجرى الدم والدماغ.

ابدأ بزراعة HBVP في قوارير استزراع T75 بسطح نشط للتصاق الخلايا داخل حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية حتى التقاء. بمجرد الوصول إلى التقاء ، استنشق وسط الطفيلي القديم واغسل الخلايا ب 5 ملليلتر من برنامج تلفزيون Dulbecco الدافئ. قم بشفط PBS الخاص ب Dulbecco وافصل الخلايا عن القارورة ، باستخدام مزيج من 4 ملليلتر من محلول التربسين-EDTA الدافئ و 1 مليلتر من Dulbecco's PBS.

احتضان القارورة لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. انظر تحت المجهر للتأكد مما إذا كانت الخلايا منفصلة عن القارورة. أضف 5 ملليلتر من وسط الطفيليات الدافئة ، التي تحتوي على 2٪ FBS إلى القارورة ، وانقل الخلايا المنفصلة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلترا. قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية لمدة ثلاث دقائق عند 200 جم ، مما يسمح للخلايا بتكوين حبيبات في قاع الأنبوب.

استنشق الوسط من الأنبوب, ضمان بقاء حبيبات الخلية سليمة. أعد تعليق حبيبات الخلية في وسط طفيلي. احسب كمية الوسط ، اعتمادا على التقاء الخلايا وعدد إدخالات البئر المطلوبة. خذ 10 ميكرولترات من الخلايا المعلقة. ضعها في شريحة عد الخلايا ، واحسب عدد الخلايا.

حدد كثافة الخلية وبذرة 300,000 خلية لكل إدراج في 1 مليلتر من وسط الطفيلي على الجانب اللمعي من إدراج البئر. قم بزراعة الخلايا النجمية البشرية الأولية باستخدام وسط الخلايا النجمية ، الذي يحتوي على 2٪ FBS ، كما هو موضح في المخطوطة النصية. حدد كثافة الخلايا وبذر 300,000 خلية لكل بئر في قاع صفائح زراعة الأنسجة المكونة من 6 آبار. قم بتغطية اللوحة لمنع التبخر ، واحتضانها طوال الليل.

أخرج زراعة الأنسجة ذات 6 ألواح تحتوي على الخلايا النجمية في إدخالات البئر التي تحتوي على خلايا محيطية من الحاضنة. استنشق وسط الخلايا النجمية من ألواح ثقافة الأنسجة المكونة من 6 آبار ، وأضف 1 مليلتر من وسط الطفيليات و 1 مليلتر من وسط الخلايا النجمية إلى كل بئر.

استنشق وسط الحضاق من إدخالات البئر ، وضعها في صفائح ثقافة الأنسجة المكونة من 6 آبار تحتوي على الخلايا النجمية المصنفة. بذور HBMEC بكثافة 300,000 خلية لكل بئر في 2 مل من الوسط الكلاسيكي الكامل على الجانب القمي من نفس إدراج البئر.

09:36

جيل من الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ الفئران مخلد الخط الخلية البطانية باعتبارها في المختبر حاجز الدم في الدماغ الموديل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

16:26

وضع ما يصل إلى في المختبر نموذج من الفئران حاجز الدم في الدماغ (BBB): التركيز على BBB عدم النفاذ والنقل مستقبلات بوساطة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:56

الأوكسجين الجلوكوز الحرمان وعودة التأكسج باعتبارها في المختبر الإسكيمية-ضخه من الإصابات نموذج لدراسة الدم في الدماغ الحاجز الجنسي لدى الرجال

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:40

تحسين طريقة لإعداد القائم على الخليوي، الاتصال نموذج الإنسان من حاجز الدم في الدماغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:23

تحسين أسلوب لإنشاء في المختبر حاجز الدم – المخ نموذج استناداً إلى خلايا المخ الخنزيري بطانية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:52

نموذج واجهة دماغ دم البشري لدراسة نقاط عبور الحاجز بمسببات الأمراض أو الأدوية وتفاعلاتها مع الدماغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:26

تحليل نفاذية حاجز الدم في الدماغ من قبل اجتياز الميكروبات من خلال الخلايا البوائية الدقيقة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:20

جيل من iPSC الإنسان القائم على الدم في الدماغ حاجز رقاقة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:21

نظام خلايا ثلاثي الثقافة نمذجة حاجز الدم والدماغ البشري

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:06

نموذج زراعة الخلايا الأولية الثلاثية للحاجز الدموي الدماغي البشري لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية في المختبر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026