تحليل بقاء خلايا بركنجي في مزارع شرائح المخيخ العضوية

ابدأ بدماغ جرو الفأر.

عزل المخيخ والحصول على شرائح الأنسجة بسماكة مناسبة.

انقل الشرائح إلى إدخالات غشائية موضوعة داخل آبار لوحة الثقافة التي تحتوي على وسائط.

في الآبار المعالجة ، تحتوي الوسائط على مركب اختبار واقية من الأعصاب. تفتقر آبار التحكم إلى المركب. حضن.

في ظل ظروف التحكم ، تخضع خلايا بركنجي المخيخية لموت الخلايا المبرمج ، مما يحاكي التطور المبكر بعد الولادة في الجسم الحي.

في الآبار المعالجة ، اعتمادا على إمكاناته ، قد يحمي المركب الخلايا من موت الخلايا المبرمج.

اغسل الشرائح وقم بإصلاحها للحفاظ على سلامة الخلوية.

انقل الشرائح إلى محلول مانع للنفاذية لاختراق أغشية الخلايا وسد مواقع الارتباط غير المحددة.

تراكب مع الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتين مرتبط بالكالسيوم يتم التعبير عنه على وجه التحديد في خلايا بركنجي.

غسل وإدخال الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية.

قم بتلطيخ النوى بصبغة ملزمة للحمض النووي وقم بتركيب الشرائح.

باستخدام مجهر متحد البؤر ، حدد كمية خلايا بركنجي القابلة للحياة لتحديد إمكانات الحماية العصبية لمركب الاختبار

لحصاد المخيخ ، استخدم ملقط ضمادة مستقيمة لإمساك رأس الجرو من الأنف ، واستخدم مقص العين المستقيم لفتح فروة الرأس من الطرف الخلفي بشكل جانبي إلى خط الوسط. افتح الجمجمة بنفس الطريقة ، مع توجيه أطراف الم