JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:35 د • July 8th, 2025
ابدأ بعينات أنسجة الحصين التي تحتوي على خلايا عصبية وخلايا غير عصبية مختلفة.
أضف محلول إنزيم البروتياز. يحط الإنزيم من المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى تفكك الخلايا.
يغسل بوسط طلاء لإزالة الإنزيمات المتبقية.
ماصة الأنسجة المهضومة بشكل متكرر لفصل الخلايا ميكانيكيا عن الأنسجة ، وتشكيل تعليق أحادي الخلية.
جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في وسط الطلاء.
قم بزرع الخلايا على غطاء مطلي ب poly-D-lysine في طبق متعدد الآبار. يسين يعزز ارتباط الخلايا.
استبدل وسط الطلاء بوسيط صيانة الخلايا العصبية الذي يحتوي على العناصر الغذائية الأساسية لبقاء الخلايا العصبية.
قم بتحديث نصف الوسائط باستخدام وسائط الصيانة التي تحتوي على أرابينوزيل سيتوزين أو Ara-C.
يدخل Ara-C إلى الخلايا ويمنع بشكل انتقائي نمو الخلايا غير العصبية ، مما يؤدي إلى موتها.
استبدل الوسائط بوسائط صيانة جديدة لدعم بقاء الخلايا العصبية.
لفصل الخلايا العصبية في الحصين للثقافة ، قم بإذابة محلول إنزيم البروتياز ، وقم بتسخين وسط الطلاء مسبقا عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، اشطف الحصين المقطوع باستخدام SLDS. ثم قم بإزالته ، وأضف 2 مل من محلول إنزيم البروتياز ، واحتضن العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
بعد ذلك ، اغسل مستخلصات الحصين ب 5 إلى 10 مل من وسط الطلاء مرتين ، وأضف 5 مل من وسط الطلاء. قم بفصل نباتات الحصين إلى خلايا مفردة عن طريق توليد دوامة صغيرة باستخدام ماصة ذات طرف بلاستيكي سعة 1 ملليلتر. الماصة لأعلى ولأسفل حوالي 40 مرة ، وتجنب تكوين فقاعات الأكسجين حتى يصبح المحلول غائما ولا تبقى قطع كبيرة من النبات.
بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للخلايا عند 1,125 ضعف الجاذبية لمدة 3 دقائق. قم بإزالة المادة الطافية مع غمر الخلايا في وسط ، وأعد تعليق الخلايا في 145 مل من وسط الطلاء. ثم أضف 1 مليلتر من تعليق الخلية لكل بئر إلى طبق 24 بئرا. احتضان الخلايا في وسط الطلاء عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين إلى أربع ساعات.
بعد ذلك ، قم بإزالة وسيط الطلاء واستبدله بوسيط صيانة جديد. بعد يومين ، استبدل نصف الوسط باثنين من micromolar Ara-C مذابين في وسط الصيانة لمنع نمو الخلايا الليفية والخلايا البطانية والدبقية. ثم ، بعد تعريض الخلايا ل Ara-C لمدة يومين ، استبدل الوسط بوسيط صيانة جديد.
يفصّل هذا المقال عملية فصل عصبونات الحصين من عينات الأنسجة لغرض الزرع. وهو يستعرض الخطوات المتبعة في تحضير الخلايا للحفاظ عليها وتنميتها في المختبر (in vitro).
يسمح الفصل الموثوق والمستنبت للخلايا العصبية في الحصين بإنشاء أنظمة مخبرية موحدة وغنية بالعصبونات لاستكشاف الأدوية في المراحل المبكرة من أبحاث العلوم العصبية. وتوفر هذه المستنبتات منصة محكومة لاستقصاء الآليات العصبونية، مما يدعم الثقة التنبؤية في التحقق من الأهداف والحد من المخاطر الميكانيكية. كما تعزز انتقائية هذه الطريقة للمجتمعات العصبونية الاستمرارية الترجمية واتخاذ القرارات المتعلقة بمجموعة المشاريع في المسارات البحثية التي تركز على البيولوجيا العصبية.
يتناسب بروتوكول تفكيك الخلايا العصبية وزراعتها هذا مع المرحلة الفاصلة بين الاكتشاف المبكر وتطوير المقايسات، حيث يوفر أنظمة أساسية لعمليات الفحص اللاحقة والدراسات الميكانيكية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026