فصل واستزراع الخلايا العصبية من عينات أنسجة الحصين

ابدأ بعينات أنسجة الحصين التي تحتوي على خلايا عصبية وخلايا غير عصبية مختلفة.

أضف محلول إنزيم البروتياز. يحط الإنزيم من المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى تفكك الخلايا.

يغسل بوسط طلاء لإزالة الإنزيمات المتبقية.

ماصة الأنسجة المهضومة بشكل متكرر لفصل الخلايا ميكانيكيا عن الأنسجة ، وتشكيل تعليق أحادي الخلية.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في وسط الطلاء.

قم بزرع الخلايا على غطاء مطلي ب poly-D-lysine في طبق متعدد الآبار. يسين يعزز ارتباط الخلايا.

استبدل وسط الطلاء بوسيط صيانة الخلايا العصبية الذي يحتوي على العناصر الغذائية الأساسية لبقاء الخلايا العصبية.

قم بتحديث نصف الوسائط باستخدام وسائط الصيانة التي تحتوي على أرابينوزيل سيتوزين أو Ara-C.

يدخل Ara-C إلى الخلايا ويمنع بشكل انتقائي نمو الخلايا غير العصبية ، مما يؤدي إلى موتها.

استبدل الوسائط بوسائط صيانة جديدة لدعم بقاء الخلايا العصبية.

لفصل الخلايا العصبية في الحصين للثقافة ، قم بإذابة محلول إنزيم البروتياز ، وقم بتسخين وسط الطلاء مسبقا عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، اشطف الحصين المقطوع باستخدام SLDS. ثم قم بإزالته ، وأضف 2 مل من محلول إنزيم البروتياز ، واحتضن العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

بعد ذلك ، اغسل مستخلصات الحصين ب 5 إلى 10 مل من وسط الطلاء مرتين ، وأضف 5 مل من وسط الطلاء. قم بفصل نب