موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:08 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بمستعمرات الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة من الإنسان المزروعة على مصفوفة غشاء القاعدي الملتصقة.
أضف وسيطا للتمايز المخيخي يحتوي على هرمون معين وعامل نمو ومثبطات جزيئات صغيرة.
ارفع المستعمرات باستخدام ماصة زجاجية ، وانقلها إلى لوحة تثبيت منخفضة للغاية.
يحافظ السطح منخفض التعلق على الخلايا في حالة تعليق ، مما يسهل تجميعها في أجسام جنينية ثلاثية الأبعاد ، أو EBs.
يرتبط الهرمون وعامل النمو والمثبطات بالمواقع المستهدفة الخاصة بها ، مما يعزز تمايز الخلايا الجذعية إلى أسلاف عصبية.
انقل EBs إلى آبار لوحة الاستزراع المطلية ببوليمر اصطناعي وبروتين الالتصاق لتسهيل الارتباط بالإي بي.
استبدل الوسط بوسط تمايز خال من المثبطات.
تبدأ الخلايا في الهجرة إلى الخارج من EBs ، وتشكل طبقة أحادية ثنائية الأبعاد.
قم بإزالة الوسط وأضف وسط نضج المخيخ.
تحفز عوامل النمو في الوسط نضوج الأسلاف العصبية إلى سلائف عصبية مخيخية مميزة.
في اليوم صفر ، أضف 1 مليلتر من وسط التمايز المخيخي المكمل ب 10 ميكرومولار Y27632 و SB431542 إلى كل بئر من ستة آبار مرفق منخفض للغاية أو صفيحة ULA ، وضعها في الحاضنة حتى تصبح المستعمرات المرفوعة جاهزة للإضافة إلى الآبار. قم بتنظيف الخلايا المتمايزة باستخدام ماصة زجاجية مسحوبة. شفط الوسط, وإضافة 1 ملليلتر من محلول تمرير iPSC لكل طبق 35 ملم.
بعد ثلاث دقائق من الحضانة عند 37 در
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية