JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:16 د • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة ثقافة مطلية ببوليمر اصطناعي وبروتين التصاق.
أضف الخلايا السلفية العصبية للحبل الشوكي المعلقة في وسط تمايز الخلايا العصبية الحركية ، مع استكمالها بمثبط جزيء صغير.
يسهل سطح اللوحة المطلي التصاق الخلية.
يمنع مثبط الجزيئات الصغيرة كينازات بروتين معينة ، مما يمنع موت الخلايا المبرمج الخلوي.
قم بإزالة الوسط المستهلك وأضف وسط التمايز الجديد.
يحتوي الوسيط على مركب يعزز تمايز السلف العصبي إلى أسلاف الخلايا العصبية الحركية.
بالإضافة إلى ذلك ، تظهر أسلاف ملتزمة بالدبق.
بعد ذلك ، استبدل بوسط التمايز المكمل بمثبط تخليق الحمض النووي.
تحفز هذه المثبطات بشكل انتقائي تلف الحمض النووي والموت في الأسلاف الدبقية ، بينما تتمايز أسلاف الخلايا العصبية الحركية إلى خلايا عصبية ناضجة.
اغسل الخلايا بالمخزن المؤقت وأضف وسط التمايز بدون مثبطات للحفاظ على الخلايا العصبية.
أثناء الزراعة ، استبدل الوسيط بانتظام لتجديد العناصر الغذائية.
بالإضافة إلى ذلك ، استبدل الوسط بوسيط مكمل ببروتين الالتصاق لتعزيز الارتباط العصبي ، وإنشاء ثقافة الخلايا العصبية الحركية المتجانسة.
إذا تم تجميد مزارع الخلايا السلفية العصبية ، فقم بإذابتها. بعد التبادل المتوسط وشطف PBS كما هو موضح في المخطوطة ، قم بتغيير الوسط بوسط تمايز الخلايا العصبية الحركية الذي يحتوي على 0.02 ميكرومولار سيتوزين أرابينوزيد.
بعد ذلك ، احتضان الخلايا لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون عندما تظهر الأسلاف الملتزمة بالدق كخلايا مسطحة واحدة تتكاثر تحت أسلاف الخلايا العصبية الحركية بعد الانقسامية المجمعة في مجموعات الخلايا. في وقت لاحق ، قم بإجراء تبادل متوسط كما هو موضح في المخطوطة.