عزل واستزراع أسلاف الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية الفئران

خذ جرو الفأر المخيخ.

تجانسها إلى أجزاء أصغر.

أضف إنزيما محللا للبروتين لهضم المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، وتخفيف الأسلاف الحبيبية المخيخية ، أو CGNPs ، والخلايا النجمية.

إضافة وسائط مزرعة CGNP تحتوي على مصل لإيقاف النشاط الأنزيمي. جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية الغنية بالإنزيم.

أعد تعليق شظايا الأنسجة في وسائط CGNP. قم بفصل الأنسجة ميكانيكيا لتحرير الخلايا.

بمجرد أن يستقر الحطام ، انقل المادة الطافية التي تحتوي على الخلايا إلى أنبوب جديد.

جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية مع الحطام.

أعد تعليق الخلايا في وسائط CGNP ، وبذرها في آبار صفائح متعددة الآبار مطلية ب poly-D-lysine. حضن.

تستقر الخلايا النجمية وتلتصق بقوة بطلاء بولي دي ليسين ، مقارنة ب CGNPs.

رج اللوحة واجمع المادة الطافية التي تحتوي على CGNPs. جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق CGNPs في وسائط CGNP وبذرها على صفيحة متعددة الآبار مطلية ب poly-L-ornithine. حضن.

تلتصق CGNPs بالسطح المطلي وتتكاثر ، بمساعدة مكونات الوسائط و poly-L-ornithine.

انقل ثلاثة إلى خمسة مخيخ إلى أنابيب سعة 15 ملليلترا. اغسل المخيخ بالجلوكوز HBSS قبل الطرد المركزي. الطرد المركزي الأنابيب لجمع الأنسجة. بعد الغسيل النهائي ، قم بتجانس المخيخ عن طريق ماصة برفق لأعلى ولأسفل مرتين إلى ثلاث مرات باستخدام ماصة سعة 1 مليلتر حتى يصبح حج