JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:57 د • July 8th, 2025
خذ جهازا مائعا دقيقا مغطى ببوليمر اصطناعي وبروتين التصاق.
يتكون الجهاز من آبار وغرف ثقافة مترابطة مفصولة بأخاديد صغيرة.
تحتوي الغرف على ثقوب مثقوبة لوضع الأنسجة.
احصل على العقد ثلاثية التوائم ، وهي مجموعة من أجسام الخلايا العصبية ثلاثية التوائم ، وجراثيم الأسنان ، وهي هياكل ما قبل الولادة التي تتطور إلى أسنان بالغة ، من جنين الفأر.
ضع الأنسجة في الثقوب وأضف وسائط الثقافة المعنية.
تسهل العناصر الغذائية والفيتامينات الموجودة في وسط جرثومة الأسنان بقاء جراثيم الأسنان أثناء الزراعة.
يسهل سطح الجهاز المطلي وعوامل النمو في وسط العقد ثلاثية التوائم نمو العصبي والمحوري.
تصل المحاور إلى غرفة جرثومة الأسنان من خلال الأخاديد الدقيقة.
تؤدي الإشارات المشتقة من الأسنان إلى تنافر الخلايا العصبية ، مما يسمح للمحاور بإحاطة جرثومة الأسنان دون تعصيبها.
اغسل غرف الثقافة بمخزن مؤقت وقم بإصلاح الأنسجة باستخدام مثبت.
الثقافة المشتركة جاهزة الآن لمزيد من التحليل.
بعد تشريح العقد ثلاثية التوائم وجراثيم الأسنان ، قم بإزالة اللامينين من أجهزة الموائع الدقيقة ، واملأ الغرف ب 200 ميكرولتر من الوسائط المعنية. باستخدام الملقط ، انقل العقد ثلاثية التوائم التشريح وجراثيم الأسنان برفق إلى الثقوب التي تم إنشاؤها باستخدام لكمة الخزعة. تأكد من أن جراثيم الأسنان لا تطفو وأنها تغرق حتى تلامس الغطاء.
استزراع العينات في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. قم بتغيير وسط الاستزراع كل 48 ساعة لمدة 10 أيام. لتغيير الوسط ، أولا ، قم بإزالة الوسط عن طريق توجيه الماصة نحو الجانب الخارجي للآبار. ثم أضف الوسط الطازج الدافئ مسبقا على جانب الآبار الموجودة مقابل الغرف.
خلال فترة الثقافة ، قم بتصوير الثقافات المشتركة في أي وقت باستخدام الفحص المجهري الضوئي. بعد فترة الاستزراع ، اغسل الغرف عن طريق سحب 150 ميكرولترا من PBS في بئر واحد لكل غرفة ، واترك PBS يتدفق عبر الغرف. كرر الغسيل ما مجموعه ثلاث مرات.
بعد الغسيل الأخير ، قم بإزالة PBS وإصلاح العينات عن طريق سحب 150 ميكرولتر من 4٪ بارافورمالدهيد في PBS في بئر واحد لكل غرفة والسماح لها بالتدفق إلى الغرفة الأخرى. احتضان الجهاز في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، اغسل الغرف مرتين باستخدام PBS واستمر في إجراء مزيد من التحليل ، مثل تلطيخ التألق المناعي وتصوير النتوء.