تثقافف الخلايا العصبية العقدية الشبكية مع التغليف الشمي الشمي

خذ شبكية الفئران ، وهي طبقة حساسة للضوء من العين تحتوي على الخلايا العصبية العقدية الشبكية ، أو RGNs.

ضع شبكية العين في محلول ملحي متوازن على البارد لمنع تلف الأنسجة.

انقل شبكية العين إلى محلول يحتوي على البروتياز و DNase وقم بتقطيعها إلى قطع أصغر.

انقل المحتويات إلى أنبوب واحتضنها.

يكسر البروتياز المصفوفة خارج الخلية ويخفف الخلايا ، بينما يحلل DNase أي حمض نووي ملوث.

الماصة لأعلى ولأسفل لتفريق كتل الخلايا.

أضف محلول مثبط لإيقاف عمل البروتياز.

الطرد المركزي الخلايا لتسويتها. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في وسط نمو مناسب.

أضف معلق الخلية هذا إلى الطبقة الأحادية من الخلايا الدبقية الشمية أو خلايا OEG ، وهي نوع من الخلايا الدبقية ، واحتضنها.

تتكامل RGNs في الطبقة الأحادية OEG ، مما يؤسس نموذج الزراعة المشتركة لتقييم إمكانات التجدد العصبي ل OEGs.

ضع شبكية العين في طبق ثقافة خلية P-60 معد مسبقا مع 5 ملليلتر من EBSS البارد. بعد ذلك ، قم بنقله إلى طبق زراعة الخلايا P-60 مع غراء معاد تكوينه بالإضافة إلى 50 ميكرولتر من APV و 250 ميكرولتر من DNase بالإضافة إلى 5 ميكرولتر من APV.

قطع شبكية العين إلى قطع صغيرة بمشرط. انقل القطع إلى أنبوب بلاستيكي سعة 15 مليلتر ، واحتضنها لمدة 30 دقيقة في حاضنة مرطبة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون الذي يحرك كل 10 دقائق. قم بفصل كتل