تكوين الخلايا العصبية الناجم عن حمض الريتينويك باستخدام خلايا سرطان الفئران الجنيني

خذ معلق خلايا سرطان جنين الفأر قادر على التمايز إلى أنواع مختلفة من الخلايا.

خلايا البذور على طبق استزراع مسعور يحتوي على وسائط وحمض الريتينويك.

حضن. تمنع الأسطح الكارهة للماء التصاق الخلايا ، مما يتسبب في تكوين الخلايا للمجاميع.

يدخل حمض الريتينويك إلى مجاميع الخلايا ، مما يؤدي إلى مسارات الإشارات ويسبب التمايز إلى الخلايا السلفية العصبية.

بعد الحضانة ، اجمع مجاميع الخلية.

تجاهل الوسائط.

أضف الوسائط التي تحتوي على حمض الريتينويك وقم بزرع الركام في طبق استزراع كاره للماء.

حضن. يسهل حمض الريتينويك التمايز الخلوي المستدام إلى الخلايا العصبية.

اجمع المجاميع وقم بإزالة الوسائط.

أضف إنزيما محللا للبروتين لتعطيل التصاقات الخلايا الخلوية داخل المجاميع.

أضف وسائط تحتوي على مصل لإيقاف النشاط الأنزيمي.

فصل الركام ميكانيكيا ، وتشكيل تعليق عصبي.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية الغنية بالإنزيم.

أعد تعليق الخلايا العصبية في الوسائط وبذرها على صفيحة ملتصقة متعددة الآبار تحتوي على وسائط.

حضن. تلتصق الخلايا العصبية بالصفيحة وتنضج ، وتمتد الإسقاطات الطويلة.

لتوليد الركام ، ابدأ بإضافة 10 ملليلتر من وسط التمايز المكمل ب 5 ميكرولتر من RA إلى طبق استزراع غير معالج سعة 100 مل. قم بزرع 1 مليون خلية في طبق الاستزراع ، واحتضان عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة يومين من أجل تعزيز ت