اختبار النخاع الناجم عن التنبيغ في المختبر لخلايا سلائف الخلايا قليلة التغصن

خذ الثقافات الملتصقة للخلايا السليفة قليلة التغصن الأولية ، أو OPCs ، في وسط النمو.

أضف نواقل الفيروسات القشرية للتحكم إلى بئر التحكم وناقلات الاختبار ، وترميز بروتينات الإشارات التي تنظم تكوين النخاع ، إلى بئر الاختبار ، ثم احتضنها.

تستوعب الخلايا النواقل ، ويتم نسخ الحمض النووي الريبي الفيروسي بشكل عكسي إلى الحمض النووي ودمجه في جينوم المضيف ، مما يعبر عن بروتينات الإشارات في خلايا الاختبار.

إدخال الإنزيمات لفصل OPCs عن الركيزة.

تحييد الإنزيمات وأجهزة الطرد المركزي لإزالة الإنزيمات.

أضف وسط النمو وانقل OPCs إلى أغطية داخل صفيحة دقيقة مع عقدة جذر ظهرية ملتصقة أو خلايا عصبية DRG. اسمح ل OPCs بالاستقرار.

املأ الآبار بوسط النمو واحتضنها. يؤدي التفاعل مع الخلايا العصبية DRG إلى نضوج OPC إلى الخلايا قليلة التغصن.

تحفز بروتينات الإشارات المعبر عنها الخلايا قليلة التغصن على تكوين أغلفة المايلين حول الخلايا العصبية DRG.

تقييم تكوين غمد المايلين الناجم عن بروتين الإشارات في خلايا الاختبار مقارنة بالخلايا المنقولة بالنواقل التحكمية.

بالنسبة لهذا البروتوكول ، لديك خلايا سلائف قليلة التغصن الأولية ، OPCs ، مستزرعة في ألواح 10 سم مع 10 ملليلتر من وسائط SATO التي تحتوي على عوامل النمو التالية - CNTF و PDGF و NT3 و Forskolin. يجب أن تكون الخلايا قد تمت زراعتها لمدة 24 ساعة تحت 8٪ ثاني أكسيد الكر