عزل الخلايا العصبية المصنفة بالفلورسنت من دماغ الفئران
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:35 دقيقة • July 8th, 2025
خذ قشرة فأر معدلة وراثيا تحتوي على خلايا عصبية تعبر عن البروتين الفلوري.
قم بتثبيته على حامل العينة.
قم بتركيب الحامل على صينية الاهتزاز التي تحتوي على aCSF المؤكسج للحفاظ على الظروف الفسيولوجية للأنسجة.
باستخدام المعلمات المحددة ، احصل على شرائح إكليلية.
ضع الشرائح في حامل شبكي يحتوي على aCSF المؤكسج وحاصرات النشاط لتثبيتها.
عالج الشرائح بالبروتياز لهضم المصفوفة خارج الخلية وفك الخلايا.
يغسل باستخدام aCSF لإزالة البروتيازات.
انقل الشرائح إلى طبق استزراع مع aCSF والمصل.
تحت المجهر الفلوري ، قم بتشريح مناطق الشرائح التي تحتوي على الخلايا العصبية الفلورية.
انقل الأجزاء المقطعة إلى أنبوب يحتوي على aCSF والمصل.
فصل الأنسجة ميكانيكيا لتشكيل معلق أحادي الخلية. انقل الخلايا إلى لوحة مزرعة تحتوي على aCSF.
تحت المجهر الفلوري ، استخدم ماصة شعرية لجمع الخلايا العصبية الفلورية.
قم بتوزيع هذه الخلايا العصبية في لوحة مزرعة تحتوي على aCSF لمزيد من التحليل.
قم بتشريح الدماغ من فأر قتل رحيم عن طريق فتح الجمجمة بمقص صغير ، واستخراج الدماغ الجديد باستخدام ملقط دقيق دون الإضرار بالقشرة. ضع الدماغ في aCSF المبرد والأكسجين ، مع ترك حجر هواء متصل ب 5٪ أكسجين متوازن بثاني أكسيد الكربون طوال مدة التقسيم.
ضع الدماغ على ظرف الاهتزاز ، وقم بقطع الأقسام الإكليلية أو السهمية بسماكة 300 ميكرون. اجمع أكبر عدد ممك
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية