$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
خذ طبق بتري مغطى بالبوليمر.
أضف سلالة الخلايا قليلة التغصن ، أو خلايا OL إلى وسط ثقافة مناسب واحتضنها.
تجذب الشحنة الموجبة على طلاء البوليمر غشاء الخلية سالب الشحنة ، مما يعزز ارتباط الخلية بالطبق. تسهل عوامل النمو والعناصر الغذائية في الوسط تمدد الخلايا.
استبدل الوسط بوسط فقير بالمغذيات واحتضانه.
تؤدي
مستويات المغذيات المنخفضة إلى إجهاد خفيف في الخلايا ، مما يجعلها تفرز البروتينات والدهون والجزيئات الأخرى ، بما في ذلك عوامل النمو والسيتوكينات ، في الفضاء خارج الخلية.
اجمع الوسط في أنبوب.
قم بتعقيم الوسط لإزالة الحطام الخلوي والمكونات غير القابلة للذوبان.
يطلق على المرشح الذي يحتوي على الجزيئات النشطة بيولوجيا القابلة للذوبان التي تفرزها خلايا OL الوسط المكيف بالخلايا قليلة التغصن أو OCM.
قم بتخزين OCM في درجات حرارة منخفضة حتى الاستخدام الإضافي لمنع تدهور البروتينات والجزيئات الأخرى ، وبالتالي الحفاظ على فعالية OCM.
لوحة اثنين أو ثلاثة أطباق بتري مغلفة مسبقا مقاس 100 ملم مع 10 ملليلتر من تعليق الخلية.
احتضان في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
في غطاء التدفق الصفحي في ظل ظروف معقمة ، قم بتجديد وسط الثقافة ب 10 مل من Mbb 27 المتوسط المنخفض الدافئ.
احتضان لمدة يومين في حاضنة مرطبة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
لحصاد OCM ، اجمع المادة الطافية التي تحتوي على عوامل تفرز الخلايا قليلة التغصن. قم بتصفية تعقيم OCM باستخدام مرشح 0.22 ميكرون.