عزل الطيات العصبية القحفية من جنين الفرخ لزراعة خلايا القمة العصبية

خذ جنين كتكوت مدعوما داخل إطار من ورق الترشيح وضعه تحت مجهر تشريح.

قم بإزالة الغشاء الزجاجي ، وهو طبقة واقية تحيط بالجنين.

تحديد الطيات العصبية في الدماغ المتوسط الواقعة خلف الفصوص البصرية والأمامية للهلال القلبي، وهو السلائف الجنينية للقلب الناضج.

تحتوي

الطيات العصبية على خلايا قمة عصبية متهجرة ، وهي خلايا جذعية متعددة القدرات تتحول إلى خلايا مهاجرة أثناء النمو.

تتمايز هذه الخلايا المهاجرة إلى خلايا عصبية وغير عصبية.

استئصال الجانب الظهري من الطيات العصبية ونقل الأنسجة إلى طبق مزرعة يحتوي على مخزن مؤقت.

بعد ذلك ، ضع أغطية مغطاة ببروتين الالتصاق في آبار لوحة الاستزراع التي تحتوي على وسائط.

انقل الطيات العصبية إلى الغطاء المطلي. احتضان لتسهيل ربط الأنسجة.

أثناء الاستزراع ، تظهر خلايا القمة العصبية المهاجرة من الطيات العصبية على السطح المطلي ، مما يؤسس ثقافة خلية القمة العصبية.

انقل الجنين إلى طبق نظيف يحتوي على محلول Ringer's Pen-Strep. حرك الجنين برفق ذهابا وإيابا لإزالة أي صفار يحجب المنظر ، واستبدل محلول Ringer's Pen-Strep أو انقله إلى طبق طازج إذا أصبح غائما. ضع ظهر الجنين وجانب الإطار لأعلى تحت مجهر تشريح. اترك الجنين على الإطار الورقي لإبقائه مشدودا وثابتا في مكانه.

بعد ذلك ، قم بإزالة غشاء vitelline باستخدام ملقط لفضح الطيات العصبية. قم بتضمين ذيلية الأنسجة إلى الحويصلات البصرية المتوسعة والمنقارية إلى الدماغ الخلفي ، حيث بدأت انقباضات المعين للتو في الظهور. باستخدام مقص الزنبرك ، قم باستئصال الطيات العصبية في الدماغ الأوسط بعناية. احرص على استئصال الجانب الظهري تقريبا من الطية العصبية مع الحد الأدنى من تلوث الأنبوب العصبي والأديم الظاهر غير العصبي، ونقل الطيات العصبية إلى طبق نظيف يحتوي على محلول Ringer's Pen-Strep باستخدام ماصة P20 أو ماصة باستور زجاجية معقمة مغسولة بمحلول Ringer's Pen-Strep.

قم بتخزين الطيات المجمعة على الجليد أثناء تشريح الطيات الإضافية. بعد إزالة طبق الاستزراع من الحاضنة ، استخدم ماصة أو ماصة باستور لإزالة محلول الفبرونيكتين من طبق الغطاء أو البئر. بعد شطف الركيزة المغلفة بالفبرونكتين بمحلول Ringer's Pen-Strep ، أضف حجما مناسبا من وسائط الثقافة الكاملة إلى الطبق أو البئر.

لمنع البلاستيك ومنع الأنسجة من الالتصاق، استخدم ماصة P20 أو P200، واشطف طرف الماصة بمحلول Ringer's Pen-Strep الصفاري. بعد ذلك ، انقل الطيات العصبية المعزولة باتجاه مركز الغطاء المغطى بالألياف الفيبرونكتين ، مع الحرص على نقل أقل قدر ممكن من محلول Ringer's Pen-Strep. بعد السماح للنباتات بالاستقرار لمدة 10 إلى 15 دقيقة ، ضعها في غرفة رطبة عند 38 درجة مئوية عن طريق حمل طبق الثقافة ببطء وحذر مع طيات عصبية مطلية.