موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:41 دقيقة • July 8th, 2025
خذ نصف رأس جرو الفأر وقم بإزالة الدماغ.
قم بقص الجزء العلوي من الجمجمة واستئصال الأنسجة المحيطة لتصور الكبسولة الأذنية ، وهي طبقة خارجية عظمية تحمي هياكل الأذن الداخلية.
انقل الأنسجة إلى صفيحة مزرعة تحتوي على وسط مخزن.
افصل بين العقد الدهليزية العلوية والسفلية ، والتي تحتوي على أجسام الخلايا العصبية الدهليزية.
احلق التلال العظمية واحصد العقدة العلوية الأساسية.
انقل العقدة العلوية إلى صفيحة جديدة تحتوي على الوسط المخزن مؤقتا.
قم بإزالة الأنسجة الملتصقة من السطح لتنظيف العقدة المعزولة.
ضع العقدة في محلول يحتوي على إنزيمات محللة للبروتين.
تعملالإنزيمات على تحلل المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى إرخاء الخلايا.
انقل العقدة إلى طبق زجاجي مطلي بالبوليمر يحتوي على وسط ثقافة وقم بفصل الأنسجة ميكانيكيا لتحرير الخلايا.
احتضان ، مما يسمح للخلايا بالالتصاق وإنشاء ثقافة الخلايا العصبية العقدية الدهليزية.
استخرج دماغ الفأر القتل رحيم باستخدام مقص جراحي مغلق. قطع العصب القحفي وإزالته لفصل الدماغ تماما عن الجمجمة. بدءا من مؤخرة الرأس ، اسحب المادة الغشائية الشفافة بالملقط ، ثم اقطع الجزء العلوي من الجمجمة باستخدام مقص جراحي.
قم بإزالة الأنسجة الزائدة من مؤخرة الرأس والرقبة ، لجعل منطقة التشريح وكبسولة الأذن أكثر نظافة وسهولة في الوصول إليها. انقل الأنسجة إلى طبق بتري ثان بمحلول L-15 الطازج. بعد ذلك ، حدد موقع الكبسولة الأذنية والأعصاب السمعية والدهليزية العلوية والأعصاب الدهليزية السفلية. افصل العقد العلوية والسفلية باستخدام مقص زنبركي صغير ، واقطع العصب السمعي.
باستخدام مشرط ، احلق الحافة العظمية برفق لإضعاف المنطقة العظمية التي يغوص تحتها العصب في الكبسولة العظمية. قم بإزالة الحطام بعناية باستخدام مشرط ، مع تعريض الجزء المتورم بالكامل من العقدة.
استخدم مقص الزنبرك الناعم لقطع وفصل العقدة عن فرع العصب المحيطي الذي يغوص باتجاه الرحم. قم بإزالة العقدة العلوية باستخدام ملقط ناعم ، وانقلها إلى طبق بتري مقاس 35 ملم بمحلول L-15 الطازج.
بعد التسخين المسبق لمحلول الإنزيم ، اسكب خليط الإنزيم في طبق بتري مقاس 35 ملم ، وضعه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 10 إلى 15 دقيقة. نظف العقدة باستخدام ملقط ناعم ومقص زنبركي صغير عن طريق إزالة العظام والأنسجة الزائدة والألياف العصبية وأي هياكل أخرى زائدة عن الحاجة. احرص على تقليل إزالة أي أنسجة عقدية.
انقل العقد التي تم تنظيفها إلى محلول الإنزيم المسخن مسبقا ، وضعها مرة أخرى في الحاضنة لمدة 10 إلى 40 دقيقة. ثم انقل العقد إلى طبق بتري مقاس 35 ملم بمحلول L-15 الطازج.
بعد دقيقتين إلى ثلاث دقائق ، انقل العقد إلى طبق بتري آخر مقاس 35 ملم مليء بوسائط الثقافة المفلترة. انقل ما يقرب من 150 ميكرولترا من وسائط الاستزراع المفلترة إلى طبق سفلي زجاجي مطلي. ثم انقل العدد المطلوب من العقد إلى الغطاء.
اسحب كمية صغيرة من وسائط الاستزراع من طبق الاستزراع، واشطف ماصة التريف بوسط لمنع الأنسجة من الالتصاق بجوانب الماصة الزجاجية. قم بإخراج الأنسجة برفق وبشكل متكرر عبر الماصة حتى يتم فصل العقد بشكل كاف.
بعد خمس دقائق ، تحقق تحت المجهر الضوئي لمعرفة ما إذا كانت الخلايا قد استقرت على الغطاء. ضع طبق ثقافة بحذر في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 12 إلى 24 ساعة.