عزل واستزراع الخلايا السليفة قليلة التغصن من قشرة دماغ جرو الفأر

خذ قشرة جرو الفأر.

أضف إنزيما محللا للبروتين يهضم المصفوفة خارج الخلية للنسجة. ثم ، قم بفصل الأنسجة ميكانيكيا ، وقم بفك الخلايا.

أضف الوسائط الدبقية و DNase لتحلل أي حمض نووي ملوث.

فصل الأنسجة ميكانيكيا لإطلاق الخلايا العصبية والخلايا الدبقية.

بمجرد أن يستقر النسيج غير المهضوم ، اجمع الوسائط التي تحتوي على الخلايا وأجهزة الطرد المركزي. قم بإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق الخلايا في الوسائط الدبقية ووضعها على قارورة مصفوفة مغلفة بالبروتين خارج الخلية.

حضن. تلتصق الخلايا النجمية بالسطح المطلي بقوة أكبر من الخلايا الأخرى. تعزز الوسائط الدبقية بقاء الخلايا الدبقية فقط.

استبدل الوسائط لإزالة الحطام.

احتضان مع الاهتزاز لفصل الخلايا السليفة قليلة التغصن المغطاة ، OPCs ، والخلايا الدبقية الصغيرة.

انقل الوسائط مع الخلايا إلى لوحة ثقافة.

احتضان مع الاهتزاز لتسهيل التصاق الخلايا الدبقية الصغيرة التفاضلية.

انقل المادة الطافية OPC غير الملتصقة إلى صفيحة متعددة الآبار مطلية ب poly-D-lysine. احتضان للالتزام OPC.

استبدل الوسائط بوسائط OPC ، مما يسمح بنمو OPC.

أضف 1 مليلتر من 0.05٪ تريبسين مع 0.53 مللي مولار EDTA إلى كل أنبوب به أنسجة. قم بثلاثية الخليط بماصة سعة 10 ملليلتر حوالي 20 مرة. ثم انقل معلق الخلية إلى أنبوب مخروطي فارغ سعة 50 ملليلترا.

احتضن المحلول عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكرب