تقنية لتوليد عضيات الدماغ من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

خذ مستعمرات من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية ، أو hESCs ، المزروعة على مصفوفة داعمة.

استنشق الوسط وأضف الإنزيمات التي تحلل المصفوفة.

يغسل لإزالة الإنزيمات. ثم أضف وسيطا وماصة لإخراج المستعمرات المخففة ، وتقسيمها إلى مجموعات أصغر.

انقل العناقيد إلى وسط جديد واحتضانه ، مما يسمح للعناقيد بتكوين مجاميع كروية.

اسمح للكرات بالاستقرار وإزالة أي خلايا ميتة.

احتضان بوسيط يحتوي على عامل نمو الخلايا الليفية الأساسي ، أو bFGF ، لتكاثر الخلايا.

قم بالتجديد بوسائط تحتوي على تركيزات bFGF متناقصة تدريجيا لتسهيل تمايز الخلايا.

أدخل وسيطا تحريضيا عصبيا ، مما يعزز تمايز hESC إلى خلايا جذعية عصبية أو NSCs ، وتحويل الكرات إلى عضيات تظهر بنية شبيهة بالوردة العصبية.

أضف المضادات الحيوية لمنع نمو أي ميكروبات ملوثة أثناء الاستزراع المطول.

تتمايز الخلايا العصبية الوطنية إلى خلايا عصبية وخلايا دبقية ، وتطور العضيات تدريجيا إلى بنية معقدة تشبه قشرة الدماغ.

قم

بتخفيف محلول مخزون البروتياز إلى تركيز العمل عن طريق إضافة 1 مليلتر من محلول المرق إلى 5 ملليلتر من وسط DMEM أو F12 لكل صفيحة ذات 6 آبار من hESCs. قم بشفط وإزالة وسائط زراعة الخلايا ثم قم بتغطية hESCs بمحلول البروتياز ضع الألواح في الحاضنة لمدة 10 إلى 15 دقيقة ، أو حتى تتجمع حواف المستعمرات وتبدأ في الانفصال عن المصفوفة ، ولكن قبل أن تتجمع تماما.

قم ب