JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:37 د • July 8th, 2025
لتقليل التلوث في مزارع الخلايا الجذعية العصبية ، استخدم منشأة بها غطاء رقائقي ، وغرفة عازلة ، وغرفة معالجة ، وغرفة مجهر ، كل منها مفصول بأبواب محكمة الإغلاق.
الآن ، املأ الماء في لوحة ثقافة في الحاضنة للحفاظ على الرطوبة.
اضبط الغرفة العازلة وغرفة المعالجة ومعلمات الحاضنة على المستويات المثلى.
نظف جميع الأسطح بشاش مطهر ومعقم للتخلص من الملوثات الميكروبية.
ضع لوحة زراعة الخلايا الجذعية العصبية أولا في الغطاء الرقائقي الذي يوفر الهواء المصفى.
امسح الجزء الخارجي من اللوحة بشاش مبلل بالإيثانول ثم انقله إلى الغرفة العازلة التي توفر الهواء المفلتر بمستويات الغاز المثلى.
أخيرا ، انقل اللوحة عبر غرفة المعالجة إلى الحاضنة وأغلق الباب.
بعد الحضانة ، انقل لوحة الثقافة مرة أخرى إلى غرفة المعالجة مع بعض الوسائط الطازجة.
موازنة الوسط الطازج.
قم بتحديث الوسيط في لوحة الثقافة وأعد احتضان اللوحة.
ضع ثلاثة أطباق بتري في وعاء الماء عند قاعدة كل حاضنة. املأ هذه الأطباق بالماء المعقم ، وحافظ على مستوى الماء في هذه الأطباق لأنها ضرورية للحفاظ على نقطة ضبط الرطوبة النسبية في الحاضنة.
داخل الواجهة الرسومية ، انقر فوق الحاضنة. بعد ذلك ، انقر فوق القيمة الحالية للرطوبة النسبية أسفل نقطة الضبط وأدخل 85٪. ثم انقر فوق علامة الاختيار الخضراء لقبول هذه القيمة.
بعد ذلك ، اضبط الغرف العازلة وغرفة المعالجة والحاضنة على نقاط ضبط الغاز المطلوبة لنوع الخلايا التي يتم إدخالها. نظف سطح حجرة المعالجة بشاش معقم ومطهر غير قابل للاشتعال ، مثل المنتجات القائمة على كلوريد البنزالكونيوم.
بعد ذلك ، قم بتنظيف القفازات والأسطح التي يتم لمسها بشكل شائع ، مثل مقابض الأبواب. بعد ذلك ، قم بتنظيف سطح غطاء التدفق الصفحي والغرفة العازلة بنسبة 70٪ من الإيثانول واتركه حتى يجف.
بعد ذلك ، ضع القارورة أو صفيحة الخلايا في الغطاء ، وامسح سطحها الخارجي لفترة وجيزة باستخدام إسفنجة شاش معقمة مشبعة بالإيثانول. ثم ضع القارورة أو اللوحة في الغرفة العازلة وقم بتشغيل عامل التخفيف. عند الانتهاء ، انقل القارورة أو اللوحة على الفور إلى الحاضنة المناسبة.
نظرا لأن الحاضنة موجودة في الجزء الخلفي من غرفة المعالجة ، اسحب رفا إلى غرفة المعالجة لوضع الخلية وتجنب فتح أبواب الحاضنة دون داع أو لفترات طويلة من الزمن.
في هذه الخطوة ، قم بإعداد وسط زراعة الخلية. اسمح للوسيط بالتوازن مع مستويات ثاني أكسيد الكربون والأكسجين الموجودة داخل النظام عن طريق ترك حاوية الوسائط غير مغطاة قليلا لمدة 20 دقيقة.
بعد ذلك ، قم بإزالة الوسط القديم من الآبار. بالنسبة للخلايا الجذعية متعددة القدرات ، قم بإزالة كل الوسط القديم تقريبا مع بقاء كمية صغيرة من الوسط القديم ، لمنع الجفاف أثناء عملية التغذية. بالنسبة للخلايا الجذعية العصبية ، قم بإزالة نصف الوسط القديم. بعد ذلك ، أضف وسطا جديدا إلى ألواح زراعة الخلايا ، ثم ضع الألواح مرة أخرى في الحاضنة المخصصة لها.