تنقية خلايا السلائف البطانية CD31 + باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:32 دقيقة • July 8th, 2025
خذ مزرعة ملتصقة للخلايا السلفية البطانية أو EPCs ، وهي سلائف للخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ.
تتكون المزرعة ، التي تم الحصول عليها عن طريق تمييز الخلايا الجذعية متعددة القدرات ، من EPCs إيجابية لعلامة السطح CD31 والخلايا السالبة CD31 الملوثة.
احتضان كاشف تفكك لفصل الخلايا والتصفية للحصول على تعليق أحادي الخلية.
أضف وسيطا لتحييد الإنزيمات ، وجهاز طرد مركزي للتخلص من المادة الطافية ، وإعادة تعليق الخلايا في مخزن مؤقت.
احتضان بكاشف مانع لتثبيط مستقبلات Fc الخلوية ، مما يمنع وضع العلامات غير المحددة.
أضف جسما مضادا مترافقا بالفلوروفور مخصصا ل CD31 واحتضنه لتسمية EPCs.
أجهزة الطرد المركزي والتخلص من الأجسام المضادة غير المرتبطة. احتضان بمجمعات الأجسام المضادة التي تحتوي على جسم مضاد واحد يرتبط بالفلوروفور.
أدخل الجسيمات النانوية المغناطيسية المطلية بالبوليمر واحتضانها ، مما يسمح للجسيمات النانوية بالارتباط بالجسم المضاد الثاني للمجمعات.
باستخدام مجال مغناطيسي ، اعزل الخلايا المرتبطة بالجسيمات النانوية.
تخلص من التعليق بخلايا CD31 سالبة غير مصنفة وأعد تعليق الخلايا المنقاة في وسط. EPCs الإيجابية CD31 جاهزة لإجراء فحوصات المصب
.في اليوم 5 من زراعة الخلايا السلفية البطانية ، قم بشفط الوسط من الآبار وأضف 1 مليلتر من كاشف التفكك إلى كل بئر. احتضن الطبق لمدة 6 إلى 8 دقائق ع
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية