تكوين وتوسيع المجالات العصبية من أنسجة الحصين

ابدئي بتلفيف مسنن الحصين بعد الولادة ، وهو نسيج دماغي غني بالجذع العصبي والخلايا السلفية ذات القدرة على التجديد الذاتي.

أضف إنزيمات التربسين التي تفصل المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى إرخاء الخلايا.

بعد ذلك ، قم بإزالة الإنزيمات وغسل الأنسجة بشكل متكرر باستخدام مخزن مؤقت.

استبدل المخزن المؤقت بوسط ثقافة الخلايا العصبية المخصب بعوامل النمو.

الماصة بشكل متكرر لفصل الأنسجة وإطلاق الخلايا في الوسط.

بذر معلق الخلية المخفف في طبق بتري غير مغلف واحتضانه.

تستخدم الخلايا الجذعية والسلفية العناصر الغذائية وعوامل النمو للتكاثر.

بمرور الوقت ، تتجمع تلقائيا ، وتشكل هياكل ثلاثية الأبعاد عائمة بحرية تسمى المجالات العصبية الأولية مع مجموعة خلايا غير متجانسة.

اجمع هذه المجالات العصبية وتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق المجالات العصبية في وسط ثقافة الخلايا العصبية ، وانفصله إلى تعليق أحادي الخلية.

أعد زراعة هذه الخلايا في طبق بتري غير مغلف لتشكيل مجالات عصبية ثانوية مع مجموعة خلايا متجانسة نسبيا.

لفصل عينات SVZ و DG ، أضف التربسين-EDTA 0.05٪ إلى التركيز النهائي من 5٪ إلى 10٪ من التربسين-EDTA في HBSS إلى كل أنبوب لمدة 15 دقيقة تقريبا عند 37 درجة مئوية.

يمكن أن يؤدي الإفراط في استخدام التربسين أو وقت الحضانة الطويل جدا إلى زيادة موت الخلايا ، مما يؤثر سلبا على نمو الخلايا.

وتكتلت الأنسجة م