تنقية الشعيرات الدموية من دماغ الخنازير

خذ دماغ الخنزير.

قم بإزالة السحايا ، الغشاء الواقي الذي يغطي الدماغ ، لمنع تلوث الخلايا السحائية.

اكشط المادة الرمادية ، وهي منطقة غنية بالشعيرات الدموية ، واجمع الأنسجة في طبق استزراع يحتوي على وسائط.

مرر المادة الرمادية من خلال حقنة بدون إبرة لتفتيت الأنسجة.

انقل الشظايا إلى الخالط وتجانسها لتفكيك الأنسجة بشكل أكبر ، وتحرير الشعيرات الدموية في الدماغ.

قم بتمرير الجانس عبر مرشح بحجم مسام محدد للاحتفاظ بالشعيرات الدموية ، مما يسمح لخلايا الدماغ الأخرى بالتدفق من خلالها.

ضع المرشح في محلول يحتوي على الإنزيمات و DNase.

تقوم

الإنزيمات بفصل الخلايا الملتصقة ، بينما يتحلل DNase للحمض النووي الملوث ، مما يسهل عزل الشعيرات الدموية النقية.

اغسل الشعيرات الدموية من الفلتر.

أضف وسائط تحتوي على بروتينات المصل لتعطيل الإنزيمات.

انقل الشعيرات الدموية إلى أنبوب ، وجهاز طرد مركزي ، وقم بإزالة المادة الطافية. قم بتعليق الشعيرات الدموية النقية في وسائط جديدة لمزيد من التحليل.

لبدء هذا الإجراء ، ضع الأدمغة في مقعد تدفق معقم ، واغسلها برفق باستخدام 1 لتر من PBS في دورق يوضع على الجليد. بعد ذلك ، قم بإزالة السحايا بعناية من كل دماغ باستخدام ملقط رفيع الأطراف. باستخدام مشرط ، اكشط المادة الرمادية من الأدمغة واحدة تلو الأخرى ، وانقل المادة المعزولة إلى أطباق بتري التي تحتوي على 20 مل من DMEM / F12 الموض