الحث في المختبر للوصلات العصبية العضلية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان

تبدأ مع iPSCs البشرية هندسيا التي تحتوي على تمايز myoblast أو MYOD بروتين ترميز, الجين المحفز للدوكسيسيكلين في وسط الخلايا الجذعية التي تحتوي على مثبطات رو-كيناز.

انقل الخلايا إلى ألواح مغلفة ب ECM واحتضانها لتعزيز ارتباط الخلية.

وفي الوقت نفسه ، يقوم المثبط بتعطيل إنزيمات Rho-kinase داخل الخلايا ، مما يعزز صلاحية الخلية.

استبدل الوسط بوسط خلية جذعية يحتوي على الدوكسيسيكلين.

يدخل الدوكسيسيكلين إلى الخلايا ويرتبط بالبروتينات المنشطة. ترتبط هذه المجمعات بالمحفز ، مما يؤدي إلى التعبير الجيني في بعض الخلايا وإنتاج بروتينات MYOD ، والتي تؤدي إلى تمايز الخلايا الجذعية إلى خلايا عضلية.

عالج الخلايا بوسط تمايز عضلي يحتوي على عوامل تمايز عضلي لتعزيز تكوين الأنابيب العضلية ، وهي خلية عضلية متعددة النوى.

في وقت لاحق ، أدخل وسيطا تحريضيا عصبيا مع عوامل النمو العصبي.

هذه العوامل تميز iPSCs المتبقية إلى الخلايا العصبية الحركية وخلايا شوان التي تشكل غمد المايلين حول الخلايا العصبية.

أخيرا ، استبدل الوسط بوسيط تقاطع عصبي عضلي لتعزيز الروابط بين الخلايا العصبية الحركية والأنبوب العضلي ، وتشكيل تقاطعات عصبية عضلية.

اغسل الخلايا ب 3 ملليلتر من PBS قبل إضافة 1 ملليلتر من محلول انفصال الخلايا إلى طبق بتري. بعد 10 دقائق عند 37 درجة مئوية ، أضف 3 ملليلتر من وسط الخلايا الجذعية الجنينية للرئيسيات إلى كل ب