عزل الخلايا السلفية الجذعية العصبية عن منطقة الحبل الشوكي حول البطين للفأر البالغ

ابدأ بالأنسجة المحيطة بالبطينين للحبل الشوكي للفأر البالغ ، وهي منطقة غنية بالخلايا الجذعية العصبية / السلف.

انقل الأنسجة إلى محلول يحتوي على غراء و DNase.

غراء ، إنزيم محلل للبروتين ، يشق المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، بينما يحلل DNase الحمض النووي الملوث المنبعث من الخلايا التالفة.

قم بفصل الأنسجة ميكانيكيا للحصول على معلق أحادي الخلية.

انقل التعليق إلى أنبوب وقم بطرده المركزي. قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في محلول يحتوي على بروتين الألبومين ومثبط للبروتياز.

الألبومين والمثبط يعطل غراء.

ضع طبقة من تعليق الخلية فوق محلول يحتوي على الألبومين ومثبط للبروتين.

يشكل

الاختلاف في الكثافات بين الطبقات تدرجا متقطعا للكثافة.

جهاز طرد مركزي لتسوية الخلايا السليمة ، بينما تبقى شظايا غشاء الخلية في الواجهة.

تخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في وسط النمو وقم بصفيحتها.

تعزز

عوامل النمو بشكل انتقائي تكاثر الخلايا الجذعية / السلفية العصبية وتجميعها في مجالات عصبية ثلاثية الأبعاد.

لبدء عزل الخلايا الجذعية العصبية للفئران ، استخدم مقصا دقيقا لفرم الأنسجة المحيطة بالبطينين المقطعة إلى قطع 1 مليمتر مكعب. بعد ذلك ، قم بإعداد المخزن المؤقت للتفكك الأنزيمي عن طريق إضافة 5 ملليلتر من محلول ملح إيرل المتوازن أولا إلى قارورة غراء من مجموعة تفكك غراء.

ضع القارورة على حرارة 37 درجة مئوي