تحضير معلق أحادي الخلية للخلايا المناعية من أنسجة دماغ الفئران

ابدأ بدماغ الفئران مع الخلايا العصبية وغير العصبية والمناعية داخل مصفوفة الدماغ خارج الخلية أو ECM.

افرم الأنسجة وأعد تعليقها في وسط ثقافة.

انقل شظايا الأنسجة هذه إلى أنبوب ومعالجتها بإنزيمات الكولاجيناز و DNase-I.

يهضم الكولاجيناز ECM ، ويطلق الخلايا الفردية ، بينما يحلل DNase-I الحمض النووي الحر لمنع تكتل الخلايا.

ثم أضف EDTA لتعطيل إنزيمات الكولاجيناز.

أضف وسيطا ثقافيا. جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية.

أضف محلول تدرج الكثافة ووسط الثقافة إلى حبيبات الخلية ، مما يؤدي إلى إنشاء طبقة متدرجة منخفضة الكثافة.

امزج المحلول ثم قم بتسطيله بمحلول تدرج عالي الكثافة لإنشاء فرق في الكثافة.

جهاز طرد مركزي بسرعة منخفضة لفصل الخلايا المناعية في الواجهة ، مع وجود بقايا خلية أخف وزنا في الأعلى وخلايا عصبية ودبقية أثقل في الأسفل.

قم بإزالة الطبقة العليا ، وجمع الخلايا المناعية ، ونقلها إلى أنبوب آخر.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية ، ثم إعادة تعليق الخلايا في وسط ، وتشكيل تعليق أحادي الخلية للتطبيقات النهائية.

صب أنسجة الدماغ أو الحبل الشوكي مع الوسائط في طبق بتري 100 ملم ، واستخدم الملقط لنقل الأنسجة إلى الأسفل. افرم أنسجة المخ بشفرة حلاقة معقمة ، واجمع الأنسجة في الجزء السفلي من اللوحة. أضف 3 ملليلتر من RPMI مكملا بنسبة 10٪ FCS إلى طبق بتري ، ثم استخدم ماصة مصلية سعة 10 ملليلتر