تحضير معلق أحادي الخلية للخلايا المناعية من أنسجة دماغ الفئران

0 مشاهدات3:51 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بدماغ الفئران مع الخلايا العصبية وغير العصبية والمناعية داخل مصفوفة الدماغ خارج الخلية أو ECM.

افرم الأنسجة وأعد تعليقها في وسط ثقافة.

انقل شظايا الأنسجة هذه إلى أنبوب ومعالجتها بإنزيمات الكولاجيناز و DNase-I.

يهضم الكولاجيناز ECM ، ويطلق الخلايا الفردية ، بينما يحلل DNase-I الحمض النووي الحر لمنع تكتل الخلايا.

ثم أضف EDTA لتعطيل إنزيمات الكولاجيناز.

أضف وسيطا ثقافيا. جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية.

أضف محلول تدرج الكثافة ووسط الثقافة إلى حبيبات الخلية ، مما يؤدي إلى إنشاء طبقة متدرجة منخفضة الكثافة.

امزج المحلول ثم قم بتسطيله بمحلول تدرج عالي الكثافة لإنشاء فرق في الكثافة.

جهاز طرد مركزي بسرعة منخفضة لفصل الخلايا المناعية في الواجهة ، مع وجود بقايا خلية أخف وزنا في الأعلى وخلايا عصبية ودبقية أثقل في الأسفل.

قم بإزالة الطبقة العليا ، وجمع الخلايا المناعية ، ونقلها إلى أنبوب آخر.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية ، ثم إعادة تعليق الخلايا في وسط ، وتشكيل تعليق أحادي الخلية للتطبيقات النهائية.

صب أنسجة الدماغ أو الحبل الشوكي مع الوسائط في طبق بتري 100 ملم ، واستخدم الملقط لنقل الأنسجة إلى الأسفل. افرم أنسجة المخ بشفرة حلاقة معقمة ، واجمع الأنسجة في الجزء السفلي من اللوحة. أضف 3 ملليلتر من RPMI مكملا بنسبة 10٪ FCS إلى طبق بتري ، ثم استخدم ماصة مصلية سعة 10 ملليلتر لإعادة تعليق الأنسجة في الوسائط ونقلها إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا.

أضف الكولاجيناز من النوع الأول و DNase I إلى الأنسجة واحتضان الأنابيب في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. اقلب الأنابيب كل 15 دقيقة لخلط الأنسجة جيدا مع الإنزيمات. بعد الحضانة ، أضف EDTA إلى كل أنبوب للحصول على تركيز نهائي يبلغ 0.01 مولار ، واحتضان الأنابيب لمدة خمس دقائق إضافية لتعطيل الكولاجيناز.

أضف 9 مل من RPMI ، مكملا بنسبة 10٪ FCS لكل أنبوب ، ثم قم بالطرد المركزي للأنابيب عند 450 جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. استخدم ماصة باستور مع فراغ لشفط المادة الطافية ، مع الحرص على عدم لمس حبيبات الخلية.

أضف 3 ملليلتر من محلول تدرج الكثافة متساوي التوتر بنسبة 100٪ إلى حبيبات الخلية. بعد ذلك ، أضف وسائط RPMI 10٪ FCS إضافية لرفع الحجم النهائي إلى 10 ملليلتر وإعادة تعليق حبيبات الخلية. اقلب الأنبوب واخلطه جيدا. بعد ذلك، أدخل ماصة مصلية تحتوي على 1 مليلتر من محلول تدرج متساوي التوتر بنسبة 70٪ في قاع الأنبوب.

ضع

الأساس ببطء للحل ، مع الحرص على عدم صنع الفقاعات. قم بإزالة الماصة المصلية من الأنبوب، مع التأكد من عدم إزعاج التدرج. قم بالطرد المركزي للأنبوب عند 800 جم لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، ثم استنشق المادة الطافية ، بما في ذلك طبقة حطام المايلين حتى تبقى 2 إلى 3 ملليلتر في الأنبوب.

استخدم ماصة سعة 1 مليلتر لحصاد طبقة الخلية بين تدرج الكثافة 30٪ و70٪ ونقلها إلى أنبوب جديد سعة 15 ملليلترا. أضف وسائط RPMI 10٪ FCS لرفع الحجم النهائي إلى 15 مليلترا ، ثم قم بالطرد المركزي للخلايا عند 450 جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.

05:58

إعداد وحيدة الخلية تعليق لتحليل Cytofluorimetric من المناطق الجلد ماوس مختلفة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:21

توصيف والعزلة للماوس Microglia الأولية بكثافة التدرج الطرد المركزي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:01

تحليل تدفق Cytometric لتسلل الخلايا اللمفاوية في الجهاز العصبي المركزي أثناء التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:18

إعداد وحيدة الخلية معلقات من الطحال ماوس مع Dissociator gentleMACS

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:17

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:11

عزل الخلايا أحادية النواة عن دماغ الفأر: تقنية الطرد المركزي المتدرج للكثافة لعزل الخلايا أحادية النواة المقيمة في الدماغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:48

عزل الخلايا الدبقية الصغيرة عن قشرة دماغ الفأر البالغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:18

عزل الخلايا المناعية المتسللة للورم من دماغ الفئران

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:47

الحصول على معلقات الخلايا من أنسجة دماغ الفأر الإقفارية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:14

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026