تقنية لتحسين الثقافة العضوية الدماغية باستخدام إضاءة الضوء اللاتيني الناعم

خذ إعدادا جانبيا للإضاءة الناعمة يحتوي على لوح أكريليك مزود بوسادات بيضاء وأضواء LED بيضاء مثبتة على حافة واحدة.

ضع صفيحة متعددة الآبار منخفضة الالتصاق تحتوي على وسط تكوين الجسم الجنيني في المقدمة.

أضف الأجسام الجنينية ، أو EBs إلى الطبق.

يدخل ضوء LED من جانب لوح الأكريليك ويصدر أشعة متوازية ، مما يضيء بشكل جانبي EBs ويتيح التصور بالعين المجردة.

قم بتدوير اللوحة للحث على تدفق دوامة ، مع تقارب EBs إلى المركز.

استبدل الوسط المستهلك بوسط تكوين EB جديد.

اجمع EBs باستخدام طرف ماصة عريض التجويف.

أمسك الماصة في وضع مستقيم للسماح للماصلات بالاستقرار بالجاذبية.

انقل EBs إلى لوحة أخرى منخفضة الالتصاق تحتوي على وسط تحريض عصبي.

المس الطرف إلى الوسط. تغرق EBs بسبب التوتر السطحي السائل.

تبدأ عوامل محددة في الوسط التمايز العصبي في EBs ، وتشكل طبقة ظهارية عصبية.

استخدم لوح أكريليك شفاف بسمك 0.3 إلى 0.5 سم بحجم ورق A5 ، ولصق وسادات بيضاء على الجزء الأمامي والخلفي من لوحة الأكريليك. بعد ذلك ، قم بتثبيت صف من مصابيح LED البيضاء على حافة اللوحة بحيث يمكن للأضواء الدخول من جانب لوحة الأكريليك ثم إطلاق النار بالتوازي.

الآن ، قم بإعداد صفيحة جديدة منخفضة الالتصاق بستة آبار ، وأضف 2 مل من وسط تكوين EB إلى كل بئر. بعد إزالة EBs مع الوسيط ، باستخدام طرف ماصة عريض التجويف سعة 1000 ميكرولتر ، انقل ما يقرب من 100 EBs لكل بئر إلى لوحة منخفضة الالتصاق مكونة من 6 آبار.

لاستبدال وسط تكوين EB كل يوم بنفس الحجم من الوسط الطازج ، قم بتحفيز تدفق دوامة عن طريق تدوير الطبق على طول مدار دائري. تتلاقى EBs أو العضيات مع مركز البئر بسبب التدفق الثانوي المتولد من خلال الدوران. استنشق الوسط القديم عن طريق سحب العينة إلى حافة البئر ببطء. لا تمتص بشدة ، وإلا ستتم إزالة EBs معا. بعد ذلك ، أضف وسائط جديدة لإعادة تعليق EBs.

للحث العصبي ، قم بإعداد لوحة جديدة منخفضة الالتصاق مكونة من 6 آبار مع 3 ملليلتر من وسط الحث العصبي لكل بئر. قم بتشغيل الضوء الجانبي الناعم وقم بإيقاف تشغيل مصادر الإضاءة الداخلية الأخرى. الآن ، انقل EBs إلى اللوحة المكونة من 6 آبار مع وسيط تحريض عصبي إضافي باستخدام طرف ماصة واسع الفم لامتصاص كل من EBs ووسط الاستزراع. ثم أمسك الماصة في وضع مستقيم. سوف تغرق EBs تدريجيا تحت الجاذبية ، وتتلاقى نحو فوهة طرف الماصة.

عندما يلامس فوهة طرف الماصة سطح السائل مرة أخرى، وبسبب التوتر السطحي السائل، تغرق EBs بسرعة في الوسط. احتضان العينات عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة.